SAP与高氧肺纤维化及重组腺病毒Ad5-SAP的构建

发布时间：2020-05-12 09:58

【摘要】： 第一部分SAP与高氧肺纤维化 目的:新生儿长时间吸入高氧可发生肺纤维化及支气管肺发育不良(BPD),已受到广泛重视,但是高氧在新生儿救治中有重要作用。目前高氧肺纤维化损伤的发病机制尚不清楚。血清淀粉样物质P(SAP)是与纤维化疾病相关的细胞因子,本研究采用新生大鼠建立高氧肺纤维化的动物模型,动态观察新生大鼠在高氧暴露后其肺组织的病理改变和外周血SAP水平的变化,了解高氧导致肺纤维化过程中大鼠外周血SAP的水平变化,探讨SAP对高氧肺纤维化的影响。 方法:60只出生12小时内的清洁级Wistar大鼠(简称新生鼠)作为研究对象。随机分成2组:高氧组和空气对照组。每组30只,高氧组置于90%O2,同时空气对照组置于正常空气中喂养。分别于72小时、7天、14天检测新生鼠肺组织病理改变及外周血SAP的表达。 结果:高氧暴露72小时后,光镜下可见肺组织水肿、充血、炎性细胞浸润,肺泡内有液体渗出及出血;7天时镜下见肺间质增厚,充血、水肿、炎性细胞浸润仍明显;14天光镜下见肺组织炎性损伤减轻,但间质增厚,成纤维细胞增生明显,肺泡腔缩小,肺间质被胶原纤维和纤维细胞替代,形成肺纤维化。大鼠外周血SAP水平在高氧3天时稍高于空气对照组水平,但在高氧7天时即明显下降,低于空气对照组水平,14天时其表达水平继续下降,与空气对照组差距增大。 结论:新生鼠吸入高氧后可导致肺纤维化。长期高氧暴露可导致体内SAP水平下降,从而加重新生鼠肺纤维化形成,提示SAP在高氧肺纤维化过程中起了重要作用。 第二部分重组腺病毒Ad5-SAP的构建 目的:构建表达目的基因SAP的重组腺病毒质粒Ad5-SAP,转染包装细胞HEK293后收获高滴度的腺病毒感染液。 方法:能够表达目的基因SAP的腺病毒质粒用同源重组的方法构建,首先通过PCR的方法扩增含有设定酶切位点的目的基因片断SAP,然后与腺病毒穿梭质粒pAdTrace—TO4连结即定向克隆,再转导入已含有腺病毒骨架质粒Adeasy-1的感受态细菌BJ-Adeasy,二者在细菌内同源重组产生腺病毒质粒Ad5-SAP,最后利用脂质体帮助转染入包装细胞HEK293,经过乒乓交互感染得到高滴度病毒感染液。 结果:成功的构建腺病毒重组质粒Ad5-SAP,收获的病毒感染液滴度达2.8x108pfu/ml。 结论:细菌内的同源重组是一种高效率的构建腺病毒质粒的方法,我们已成功的构建重组腺病毒质粒Ad5-SAP,为进一步研究打下基础。
【图文】：

隆的 PCR 鉴定读复杂模版，灵敏度高，反应迅速，目的基因片断具有碱基突变几率小较高，，会增加后序基因测序的工作加入 SalⅠ和 XbaⅠ酶切位点的接头dTrace-TO4 相连接。PCR 反应结束后条约 0.7kb 的清晰条带，如图 12。

一条约 0.7kb 的清晰条带，如图 12。1. SAP gene segment; M. DNA Marker图 12 SAP 基因 PCR 产物的凝胶电泳鉴定igure 12 SAP PCR products of Gel electrophortrace-SAP 的鉴定 13
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R722.1

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本文编号：2660040