内皮素-1、血管内皮生长因子、缺氧诱导因子-1在新生鼠肺出血发生中的作用

发布时间：2020-05-20 10:51

【摘要】： 第一部分 低温缺氧/复温供氧新生鼠肺出血模型的分段建立 目的分段建立低温缺氧/复温供氧新生鼠肺出血模型,探讨新生鼠在缺氧、低温缺氧、低温缺氧后常氧复温、低温缺氧后高氧复温等不同影响因素作用下肺大体和组织学的改变; 方法选用出生后7～8天的Wister新生鼠58只,随机分为正常组(C组)10只,缺氧组(H组),低温缺氧组(HH组),低温缺氧后常氧复温组(HHR)和低温缺氧后高氧复温组(HHRO_2组)各12只。C组置常温室内,H组予缺氧(FiO_25～6%)6h,HH组缺氧同时置10±1℃冷室内,予低温缺氧6h,HHR组同HH组进行低温缺氧6h,然后置37℃环境复温并吸入空气(常氧)2h,HHRO_2组同HHR组,但复温时供高浓度氧(FiO_2＞95%)。各组新生鼠处死后取肺组织,观察肺大体情况,切片HE染色观察肺组织病理学改变。肺大体改变按等级不同分为5级。 结果1.实验组新生鼠共死亡13只,死亡率27.08%(13/48),C组无死亡;2.H组、HH组、HHR组和HHRO_2组肺大体均有改变,H组呈现水肿,HH瘀血明显,可见点状和局灶性出血,HHR组和HHRO_2组见局灶出血增多,HHR组有2例弥漫性出血,HHRO_2组有4例呈弥漫性出血,弥漫性肺出血主要发生在复温复氧阶段;各实验组肺大体改变与C组比较均有显著性差异;组间比较除HHR组与HHRO_2组外,其余各组间比较均有显著性差异。3.各实验组组织学改变包括肺泡及间质水肿、肺间隔断裂、肺泡扩张及融合和肺泡出血。 结论低温缺氧/复温供氧能成功诱发新生鼠肺出血,肺出血发生由肺水肿向点状肺出血、局灶肺出血、弥漫性肺出血发展,弥漫性肺出血主要发生在复温供氧后;缺氧、低温缺氧及复温供氧各阶段均对肺组织造成损伤;高浓度氧可能造成更严重损伤。 第二部分 内皮素-1、血管内皮生长因子、缺氧诱导因子-1在新生鼠肺出血发生过程中肺内的表达 目的探讨在低温缺氧/复温供氧新生鼠肺出血过程中内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1(HIF-1)在肺组织中的表达与作用。 方法选用出生后7～8天的Wister新生鼠58只,随机分为正常组(C组)10只,缺氧组(H组),低温缺氧组(HH组),低温缺氧后常氧复温组(HHR)和低温缺氧后高氧复温组(HHRO_2组)各12只,模型分段复制过程同第一部分。分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织中前内皮素原mRNA(ppET-1mRNA)、VEGFmRNA、缺氧诱导因子-1αmRNA(HIF-1αmRNA)的表达;放射免疫方法检测肺组织中ET-1含量;WesternBlot方法和免疫组化方法检测VEGF在肺组织中的表达。 结果1.ppET-1mRNA在H组、HH组、HHRO_2组表达增强,与C组比较,P均0.01;ET-1含量在各实验组均增高,进入复温供氧期后有所下降,各组与C组比较P均0.01;在H组、HH组,ppET-1mRNA表达与肺组织中ET-1含量呈正相关,分别r=0.72和r=0.67,P均0.05。2.VEGF188mRNA在H组、HH组表达增强,与C组比较,P均0.01;VEGF蛋白在各实验组表达增强,与C组比较,H组、HH组P均0.05,HHR组和HHRO_2组P均0.01。3.在H、HH组,ET-1与VEGF表达成正相关,分别r=0.72和r=0.66,P均0.05;4.HIF-1αmRNA表达在各组中无显著性差异,P0.05。 结论1.ET-1和VEGF在各个阶段都参与肺出血的形成;2.ET-1可能促进了VEGF的表达;3.HIF-1α在肺出血中作为核转录因子参与调控ET-1和VEGF的表达,但低氧对其调控主要在转录后水平。 第三部分内皮素-1双重受体阻断剂对新生鼠肺出血的预防作用 目的观察ET-1双重受体阻断剂(波生坦)能否降低低温缺氧/复温供氧新生鼠肺出血发生率以及肺组织中VEGF的表达,评价波生坦在预防肺出血发生中的作用。 方法选用出生后7～8天的Wister新生鼠106只,随机分为正常组(C组)10只,实验组和波生坦组各48只;实验组和波生坦组再分为H、HH、HHR、HHRO_24个亚组各12只,波生坦组实验前2h经胃管灌注波生坦,模型分步复制过程同第一部分。观察各组肺大体改变,采用Western Blot方法检测VEGF在肺组织中的表达。 结果1.波生坦组新生鼠死亡5只,实验组死亡13只,两组死亡率比较有显著性差异,X~2=3.35,P＜0.05;2.实验组肺大体改变同第一部分,包括水肿、点状出血、局灶性出血甚至弥漫性出血,波生坦组中各亚组肺大体改变均较实验组有所减轻,从HH亚组开始仍见点状肺出血发生,HHR和HHRO_2亚组可见局灶性出血,但未出现弥漫性出血,HHR和HHRO_2亚组肺大体改变与实验组相应亚组比较有显著性差异,分别T=193.5,P＜0.05和T=199.0,P＜0.01;3.与正常组比较,波生坦组中各亚组VEGF表达无显著性差异,H=3.43,P＞0.05。 结论ET-1受体阻断剂能减轻新生鼠低温缺氧/复温供氧肺出血的发生,其机制与阻断ET-1的作用及下调VEGF表达有关。
【图文】：

实验动物

正常肺Wiste:新生鼠，日龄7~8天色泽粉红，无水肿和出血
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R722.1

【参考文献】

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本文编号：2672508