过氧化氢、维甲酸对A549细胞p-p38、MKP-1和HDAC-1、-2、-3表达的影响

发布时间：2020-05-24 19:35

【摘要】：第一部分:不同浓度过氧化氢对A549细胞p-p38、MKP-1和HDAC-1、-2、-3的影响目的通过建立不同浓度过氧化氢(H_2O_2)干预的A549细胞模型,探讨不同浓度H_2O_2对A549细胞p-p38、MKP-1和HDAC-1、-2、-3蛋白表达的影响。方法不同浓度H_2O_2干预A549细胞12h,采用MTT、CCK8和LDH法检测A549细胞活力和受抑情况,Western blot法检测p-p38、MKP-1和HDAC-1、-2、-3蛋白表达。结果1.随着H_2O_2浓度提高和作用时间延长,A549细胞存活率呈浓度、时间依赖方式下降。结合CCK8、MTT和LDH结果,选择H_2O_2干预12h作为后续研究干预时间,这样既可对A549细胞产生较明显影响,同时又不会对细胞造成太大伤害影响后续实验结果。2.不同浓度H_2O_2干预A549细胞12h,与对照组(H_2O_2浓度为0umol/L)相比,随着H_2O_2浓度增加,p-p38、MKP-1蛋白表达水平呈逐渐升高趋势,当H_2O_2浓度增高至400umol/L时,p-p38、MKP-1蛋白表达量与对照组差异显著(p0.01);随着H_2O_2浓度的增加,HDAC-1、-2、-3蛋白表达水平呈逐渐降低趋势,HDAC-1、-2、-3对H_2O_2浓度敏感性不同,当H_2O_2浓度增加至100umol/L时,HDAC-1表达与对照组差异具有统计学意义(p0.05),增加至200umol/L时,HDAC-3表达与对照组差异具有统计学意义(p0.05),增加至400umol/L时,HDAC-2表达量与对照组差异具有统计学意义(p0.05)。结论通过建立氧化应激性肺损伤A549细胞模型,初步证实p-p38、MKP-1和HDAC-1、-2、-3参与肺细胞氧化应激性损伤过程。第二部分:过氧化氢、维甲酸对A549细胞p-p38、MKP-1和HDAC-1、-2、-3表达的影响目的建立H_2O_2和维甲酸(RA)干预的A549细胞模型,探讨H_2O_2和RA对A549细胞p-p38、MKP-1和HDAC-1、-2、-3蛋白表达的影响。方法取对数生长期A549细胞随机分为4组(对照组、H_2O_2组、RA组、H_2O_2+RA组)干预8、12、24h,采用Western blot法检测p-p38、MKP-1和HDAC-1、-2、-3蛋白表达,流式细胞仪检测A549细胞早期凋亡、晚期凋亡和坏死情况。结果1.RA和H_2O_2干预A549细胞8、12、24h,干预时间为8h时,与对照组比较,H_2O_2组p-p38蛋白表达水平显著增高(p0.05),RA可使H_2O_2干预后的A549细胞p-p38蛋白表达部分降低,但与H_2O_2组相比差异不显著(p0.05);RA组和H_2O_2组MKP-1蛋白表达水平均显著升高(p0.01),两者同时使用时MKP-1表达进一步增高,与H_2O_2组相比差异具有统计学意义(p0.01);H_2O_2组HDAC-1、-2、-3表达水平不同程度降低(p0.05),RA可使H_2O_2干预后的A549细胞蛋白HDAC-1、-2表达增高,与H_2O_2组相比差异具有统计学意义(p0.05),但对HDAC-3蛋白促表达作用未见明显统计学差异(p0.05)。干预时间为12、24h时,与对照组相比,H_2O_2组p-p38蛋白表达水平显著增高(p0.01),RA可使H_2O_2干预后的A549细胞p-p38蛋白表达显著降低(p0.05);MKP-1蛋白表达趋势基本与8h一致;H_2O_2组HDAC-1、-2、-3表达水平不同程度降低(p0.01),RA可使H_2O_2干预后的A549细胞蛋白HDAC-1、-2、-3表达部分增高,与H_2O_2组相比差异具有统计学意义(p0.05)。2.RA和H_2O_2干预A549细胞8、12、24h,干预时间为8h时,与对照组比较,H_2O_2可使早期凋亡细胞明显增加(p0.01),晚期凋亡+死亡细胞增加不显著(p0.05),RA对H_2O_2诱导凋亡的细胞未见明显保护作用(p0.05);干预时间延长至12、24h时,H_2O_2使早期凋亡细胞和晚期凋亡+坏死细胞均明显增加(p0.001),RA可部分逆转H_2O_2干预所导致的细胞凋亡、坏死,与H_2O_2组相比差异具有统计学意义(p0.001)。结论初步证实RA可通过调控HDACs和MKP-1表达,调节p38 MAPKs信号通路活性,在肺细胞氧化应激性损伤中发挥保护作用。
【图文】：

图 3 相差显微镜下胎鼠 AECII 体外培养 2d ×100A 对 AECII MKP-1 和 HDAC-1、-2、-3 蛋白表达的ECII 细胞随机分成 4 组（对照组、H2O2组、RA 组和 H别用 400umol/L H2O2和 10-6mol/L RA 干预 12h，采KP-1 和 HDAC-1、-2、-3 蛋白表达水平，结果显示：与 MKP-1 表达升高，，RA 则对 ACEII MKP-1 表达没有明AC-1、-2、-3 表达水平均有不同程度升高，H2O2使，但对 HDAC-1、-3 表达无明显影响；RA 使 H2O2干表达部分升高，但对 HDAC-1、-3 影响不明显（见图 ECII 产量较低，且无法增殖传代，不能满足大量实验ECII 特征的 A549 细胞完成后续实验。

图 6-1H2O2组 vs.对照组， ** p <0.01图 6-2① 图 6-2② 图 6-2③ 图 6-2④图 6-2 干预时间为 8h，图①、②、③、④依次为对照组、RA 组、H2O22+RA 组Annexin V
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R722.6

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 娄志义;;聚焦“细胞分化”试题[J];生物学教学;2012年02期

2 袁春;细胞分化的若干疑点浅析[J];中学生物教学;2003年Z2期

3 刘建峰;浅谈细胞分化[J];中学生物教学;2004年Z1期

4 马迪;;也许有一天你可以打印自己的心脏[J];今日中国;2017年05期

5 冯汉茹;陶应忠;;《细胞的分化》教学设计及反思[J];中学教学参考;2017年14期

6 江锐;;“细胞分化形成组织”(第一课时)的教学设计[J];新课程(下);2017年04期

7 赵自然;;新鲜空气使干细胞分化[J];基础医学与临床;2010年03期

8 ;CD2相关蛋白在足细胞分化中的作用[J];华中科技大学学报(医学版);2008年04期

9 张传茂;;细胞分化 中国科学家谈科学[J];科学观察;2007年06期

10 张乃群，赵丽英;植物细胞分化的研究综论[J];南都学坛;1996年06期

相关会议论文 前10条

1 叶延;严青然;杜芳;张晓明;鲍春德;;艾拉莫德抑制人B细胞分化功能的体外研究[A];第十一届全国免疫学学术大会分会场交流报告集[C];2016年

2 芦小单;谭岩;方艳秋;刘磊;林秀英;;VEGF对血细胞分化发育的调节[A];第十届全国免疫学学术大会汇编[C];2015年

3 岳文;王冬梅;袁红丰;裴雪涛;;干细胞分化调控新基因的筛选及其功能研究[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年

4 丁建东;;图案化表面与干细胞分化[A];2013年全国高分子学术论文报告会论文摘要集——大会邀请报告[C];2013年

5 徐志彦;;《细胞分化》教学案例(教学内容安排1课时)[A];河北省教师教育学会第二届中小学教师教学案例展论文集[C];2013年

6 梁冀;于会梅;傅继东;郭昂;杨黄恬;;内质网钙离子释放受体对干细胞分化的调控[A];中国病理生理学会受体、肿瘤和免疫专业委员会联合学术会议论文汇编[C];2010年

7 司聚同;邢录洲;孙红;陈德高;王永潮;;I_D基因:一个广谱性细胞分化抑制基因[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

8 项盈;金洁;沈丹;郑强;谢纯刚;贾冰冰;黄国平;王金福;;复苏的人骨髓间充质干细胞的分离、培养及向多系细胞分化的诱导[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年

9 姜朋飞;毛峥伟;高长有;;水凝胶模量和化学性质共同影响干细胞分化的研究[A];2013年全国高分子学术论文报告会论文摘要集——主题I：生物高分子与天然高分子[C];2013年

10 李靖;白祝洽;;肺泡Ⅱ型上皮细胞分化中的力学调控[A];第十二届全国生物力学学术会议暨第十四届全国生物流变学学术会议会议论文摘要汇编[C];2018年

相关重要报纸文章 前10条

1 记者 金婉霞 首席记者 许琦敏;新技术重绘细胞“成长路线图”[N];文汇报;2019年

2 记者 张建列 通讯员 黄博纯;中国科学家揭示干细胞分化新机制[N];广东科技报;2017年

3 记者 卢鹰;我国干细胞临床转化取得多项突破[N];经济参考报;2017年

4 ;大脑“后勤”细胞参与指挥神经元发育[N];科技日报;2017年

5 李伟;中英合作研究中药调控干细胞分化机理[N];医药经济报;2009年

6 陈超;科学家发现引发细胞分化的分子通道[N];科技日报;2010年

7 章静波;干细胞及其巨大的医学潜势[N];人民政协报;2000年

8 ;美试验用肿瘤细胞治中风[N];新华每日电讯;2000年

9 陈丹;美将干细胞分化成内耳毛发细胞[N];科技日报;2003年

10 记者 施嘉奇　通讯员 王姿英;探索中药对干细胞分化的作用[N];文汇报;2009年

相关博士学位论文 前10条

1 谭雯;调节性T细胞对急性呼吸窘迫综合征的保护效应及其机制的研究[D];北京协和医学院;2019年

2 郭薇;Lkb1维持T_(reg)谱系稳定性及自稳研究[D];北京协和医学院;2019年

3 高珊珊;PAK4结合并调控Abi3影响HCC细胞侵袭转移[D];武汉大学;2018年

4 郭飘;利用单细胞测序技术研究骨髓源细胞在肝癌起源中的作用[D];天津医科大学;2019年

5 隋明昊;靶向乙肝表面抗原嵌合抗原受体T细胞（HBsAg-CAR-T）的制备及其对肝细胞癌杀伤作用的实验研究[D];中国人民解放军医学院;2019年

6 李平飞;DAPK1通过死亡结构域调控mTORC1活性增强CD8~+T细胞抗病毒功能[D];华中科技大学;2018年

7 姚银;皮下特异性免疫治疗通过调控变应性鼻炎患者Tfh和Tfr细胞的功能发挥治疗作用[D];华中科技大学;2019年

8 韩晓;FoxG1在端脑发育早期调控细胞的命运决定[D];东南大学;2019年

9 李曼;Sin1-mTORC2在B细胞生长、分化发育、代谢及功能方面的作用及机制研究[D];上海交通大学;2018年

10 赵艳;miR-141调控丙型肝炎病毒感染肝癌细胞的机制研究[D];华中科技大学;2019年

相关硕士学位论文 前10条

1 苏晓曼;基于单细胞测序数据的细胞分化轨迹算法探究[D];哈尔滨工业大学;2019年

2 王小玉;MiR-140-5p靶定YES1基因影响A549细胞的凋亡与增殖[D];承德医学院;2019年

3 冯海鹏;AFP抑制GATA5功能后激活PI3K/AKT通路对肝癌细胞恶性行为的影响[D];海南医学院;2019年

4 陈娟;miR-1284、miR-1247-5p逆转MCF-7/ADR细胞耐药性的分子机制研究[D];广东药科大学;2019年

5 姬曼曼;三氧化二砷通过ATM/ATR通路上调KG1a细胞ULBP1表达[D];新乡医学院;2019年

6 付启冉;血小板反应蛋白4（THBS4）对NG2细胞体外分化的作用和机制研究[D];新乡医学院;2019年

7 刘敏;小鼠乳腺癌髓源抑制性细胞对B细胞功能的影响[D];天津医科大学;2019年

8 王曦;miR-669b-3p调控IDO抑制CD4~+T细胞增殖的体外研究[D];天津医科大学;2019年

9 王扬扬;免疫相关性全血细胞减少症患者Th9细胞数量及功能研究[D];天津医科大学;2019年

10 罗兰兰;Th17细胞及其相关因子与RVVC关系的研究[D];江苏大学;2019年

本文编号：2678886