呼吸道合胞病毒重组融合蛋白TB10.4-F1免疫原性和安全性的研究

发布时间：2020-05-27 09:05

【摘要】：呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus, RSV)是全世界范围内引起婴幼儿下呼吸道感染最重要的病原体,容易诱发毛细支气管炎、肺炎,甚至导致死亡。迄今为止,仍然没有一种安全有效的疫苗来预防RSV感染。在本研究中,将呼吸道合胞病毒F1蛋白与结核分枝杆菌TB10.4蛋白在大肠杆菌中进行了融合表达,并辅以粘膜佐剂无毒型大肠杆菌热不稳定肠毒素(E.coli heat-labile enterotoxin, LT)后免疫BALB/c小鼠,以此来分析和评价融合蛋白的免疫原性及其安全性。为获得重组TB10.4-F1融合蛋白,构建了TB10.4-F1/pET30a重组载体,同时构建TB10.4/pET28a载体以作对照。转化大肠杆菌后成功表达出了含有His标签的TB10.4-F1蛋白和TB10.4蛋白。anti-His作一抗Western-blot鉴定重组蛋白正确。大量诱导表达并获得目的蛋白的包涵体之后,在变性条件下用镍亲和层析的方法一步纯化,纯化后TB10.4-F1和TB10.4的纯度分别达到80%和95%。将纯化后的TB10.4-F1蛋白、TB10.4蛋白分别与LT混合后免疫BALB/c小鼠,设立PBS组；LT组；TB10.4组；TB10.4-F1组；TB10.4-F1+LT组,共5组,每组5只,按照0、2、4周免疫程序免疫。免疫周期结束后处死测定各项指标。结果表明：1)TB10.4-F1组和TB10.4-F1+LT组的特异性IgG水平显著高于其它对照组,说明融合蛋白可以刺激产生高水平的血清抗体；2)与TB10.4组相比,TB10.4-F1组和TB10.4-F1+LT组的IgGl/IgG2a比值更接近1,T细胞免疫反应较为平衡；3)肺组织病理切片表明,TB10.4-F1融合蛋白具有一定的免疫毒性,会造成肺组织中毛细血管扩张,嗜酸粒细胞增多；4)TB10.4组IgG1/IgG2a比值大于1,代表Th2型反应占优势。随后按同样分组免疫小鼠,免疫周期结束后,用3×105pfu的RSV滴鼻攻击免疫后的小鼠,5天之后处死测定各项指标。结果表明：1)攻毒后,TB10.4-F1+LT组和TB10.4-F1组小鼠体重下降迅速,特别是TB10.4-F1+LT组小鼠在处死前由于呼吸衰竭已死亡3只；2)TB10.4-F1+LT组和TB10.4-F1组的呼吸道灌洗液中均有IgA反应,并且TB10.4-F1+LT组IgA值又明显大于TB10.4-F1组(P0.05),说明LT的加入可以促进呼吸道粘膜处产生分泌型IgA；3)肺组织病理切片表明,攻毒后TB10.4-F1+LT组和TB10.4-F1组小鼠机体会引发严重的免疫毒理反应,说明重组TB10.4-F1蛋白存在免疫毒性,不仅没有保护作用,反而会加重小鼠病情。本实验初步探讨了融合蛋白TB10.4-F1的免疫原性及其安全性,为以后新型RSV疫苗的研发提供了理论依据。
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R725.6

【参考文献】