SSH分离鉴定大鼠肾脏发育基因，Pea3基因在大鼠肾脏发育中的表达及意义

发布时间：2020-05-28 13:12

【摘要】：肾脏发育的研究已逐渐成为肾脏病领域的一个热点，阐明肾脏发生发育的机制一方面有助于揭示先天性肾脏发育不良的机理，另一方面也有助于理解后天性肾脏疾病发生进展的病理生理过程，从而为肾脏病的诊治提供新的思路。近年来学者们研究的焦点在肾脏发育的早期阶段，着重研究肾脏早期分化基因表达差异的变化。迄今为止，国内外未见针对肾脏后期发育阶段来筛选肾脏发育相关基因的报道。研究表明，鼠类肾小球数目于生后7天才发育完毕，生后21天肾髓质始发育完善。为了更好地探讨肾脏后期发育的分子机制，本研究利用生后发育这个时间窗口，从肾脏后期发育角度出发来筛选肾脏发育相关基因。第一部分大鼠肾脏发育相关基因差减文库的构建及验证目的：分离大鼠肾脏发育相关基因，构建双向差减文库并验证。方法：分别以新生大鼠肾脏组织为检测组(tester)、生后21天肾脏为驱逐组(driver)，进行正向SSH；以生后21天肾脏为tester、新生大鼠肾脏组织为driver，进行反向SSH。经过总RNA的提取、mRNA的纯化、反转录、酶切、接头连接、2轮差减杂交和2轮PCR，获得正、反向差减杂交产物，将其克隆入质粒表达载体pGEM(?)-T Easy载体，转入XL2-Blue MRF′Uitracompetent Cells以扩增，克隆，测序，生物信息学分析，并随机挑选部分基因用RT-PCR技术验证其差异表达。结果：(1)构建了2个分别含215和142个重组子的正、反向差减文库，插入片段大小约200bp-600bp。(2)对测序结果进行初步生物信息学分析，359个差异表达克隆中，，有15个未知序列、13个蛋白未知序列、7个假想蛋白、其他的经分析代表已知功能的独立基因，对这些已知功能的差异表达基因进行分类发现主要以发育相关、信号转导相关、能量代谢相关及转录因子、核蛋白、骨架蛋白等为主。(3)
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R726.9

【参考文献】