PVL新生大鼠脑组织ephrin-B3mRNA表达及神经细胞凋亡变化

发布时间：2020-06-01 07:38

【摘要】： 目的 1．建立新生大鼠脑室周围白质软化(periventricular leukomalacia，PVL)模型，，观察新生大鼠PVL时脑组织病理学改变。 2．研究正常新生大鼠和PVL大鼠不同时间点脑组织ephrin-B3mRNA的表达变化，以及神经细胞凋亡的变化。 3．探讨ephrin-B3与神经细胞凋亡的关系。 4．探讨ephrin-B3在PVL损伤及CNS神经再生抑制机制中的意义。 方法 160只2日龄新生SD大鼠，随机分为2组，实验组(PVL组)86只，对照组(假手术组)74只，缺氧缺血(Hypoxic-ischemic，HI)后实验组死亡14只，对照组死亡2只，故进入实验的两组均为72只。采用Back等的方法建立PVL模型，分别于缺氧后0h、8h、24h、48h、72h、7d处死，HE染色观察新生大鼠PVL时脑组织病理学改变；DAPI染色检测缺氧缺血后不同时间点神经细胞凋亡；荧光定量RT-PCR检测缺氧缺血后不同时间点脑组织ephrin-B3mRNA表达变化。SPSS11．0进行统计分析，P＜0．05为差异有统计学意义。 结果 1．脑组织HE染色光镜观察：对照组细胞排列有序、胞核大、左右侧脑室对称。PVL组缺氧缺血后24h即见胼胝体细胞稀疏、排列紊乱；48小时纹状体内细胞稀疏、出现核固缩；7d可见侧脑室旁白质呈筛网状坏死。 2．ephrin-B3mRNA的表达变化：对照组大鼠脑白质中ephrin-B3mRNA表达各时间点无明显变化，差异无统计学意义(P＞0．05)；实验组大鼠脑白质中ephrin-B3mRNA表达在缺氧缺血后8h开始升高，72小时达到峰值，7天开始下降，组内不同时间点两两比较，差异有统计学意义(P＜0．05)，与对照组比较，在8h、24h、48h、72h、7d差异有统计学意义(P＜0．05)。 3．细胞凋亡检测：对照组大鼠脑室周围白质纹状体、胼胝体区在各个时间点均有少量凋亡细胞，实验组大鼠纹状体和胼胝体区细胞凋亡指数(apoptosis index，AI)在缺氧缺血后8小时开始升高，48小时达到高峰，72小时开始降低，与对照组相比，在8h、24h、48h、72h差异有统计学意义(P＜0．05)，7天时与对照组相比差异无统计学意义(P＞0．05)。 结论 1．脑组织HE染色光镜观察发现实验组大鼠缺氧缺血后出现细胞稀疏、排列紊乱、核固缩、侧脑室旁白质筛网状坏死，符合PVL病理改变，且出现生长发育不良、神经行为异常，证实PVL模型制作成功。 2．新生大鼠PVL时，脑白质ephrin-B3mRNA表达显著增加，而对照组ephrin-B3mRNA表达几乎没有变化，提示ephrin-B3参与了PVL缺氧缺血性脑损伤，可能与CNS神经元再生抑制机制有关。 3．新生大鼠PVL时，脑组织细胞凋亡指数较对照组明显增加，证实细胞凋亡仍为未成熟鼠脑缺氧缺血(Hypoxic-ischemic，HI)损伤的主要病理形式，其参与了PVL的损伤过程。 4．新生大鼠PVL时，脑组织细胞凋亡指数和ephrin-B3mRNA表达均呈先升高后降低的趋势，提示两者存在一定的相关性，但二者高峰时间并不重合，推测除了ephrin-B3还存在其它因素参与神经细胞凋亡损伤。
【图文】：

2.1新生2日龄SD大鼠，术前称重及编号，乙醚麻醉，固定于手术台上，图1。2.2常规消毒铺巾，颈部正中偏右作长约smm切口，图2。2.3分离并用5一0丝线双结扎右侧颈总动脉，图3。2.4缝合切口，以抗生素液(青霉素)冲洗局部皮肤，图4o2.5返回常氧母鼠笼中休息1小时，然后置于含6%氧气和94%氮气混合气的缺氧舱中4小时(流量ZUmin)，放回常氧母鼠笼中饲养。

四川大学临床医学硕十专业学位论文病理改变(HE染色)E染色光学显微镜下发现:对照组脐服体(图6，8，10，12)(图14，16，18，20)细胞排列有序、胞核较大、形态规则缺氧缺血24h后可见脐服体及纹状体细胞稀疏、排列紊乱(图48h可见脐服体及侧脑室旁纹状体内胶质细胞稀疏、间隙增宽乱、结构不清、核固缩变圆(图9，17);72h脐肌体和脑室出现广泛的疏松(图11，19)，7d可见脐服体及缺氧缺血侧侧质呈筛网状坏死(图13，21)。综上所见:实验组随缺氧缺血，其病理改变加重。
【学位授予单位】：四川大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R722.1

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本文编号：2691165