高压氧促进HIBD新生大鼠人神经干细胞移植疗效的实验研究

发布时间：2020-06-04 11:29

【摘要】： 目的:通过经脑室移植人神经干细胞(human neural stemcells,hNSCs)配合高压氧(hyperbaric oxygenation,HBO)治疗,观察HBO对植入的hNSCs存活、迁移、分化的影响。 方法:利用7日龄(d7)Wistar大鼠采用Rice法复制HIBD模型,并随机分为HIBD组(n=20)、移植组(n=24)、HBO组(n=20)和移植+HBO组(n=24)。利用体外培养的方法制备hNSCs单细胞悬液,d10时采用侧脑室微量注射法进行hNSCs移植,于移植后15分钟内开始HBO治疗,每日1次,连续10d。于d11,d12,d13,d20时利用原位缺口末端染色法(TUNEL法)进行皮质和海马区凋亡细胞计数。d20行病理检查,并应用免疫荧光组化染色法检测移植组和移植+HBO组植入细胞存活、迁移、分化情况。 结果: 1.胎儿脑组织体外培养12天可获得hNSCs球,免疫荧光标记显示为Nestin阳性细胞,经诱导分化后NF、GFAP染色呈阳性,提示其具有NSCs特性。 2.TUNEL阳性细胞计数:d11时各组大鼠脑组织皮层和海马区均可检测到凋亡细胞,与HIBD组比较,HBO组TUNEL阳性细胞数的差异不具有显著性,而移植组和移植+HBO组的TUNEL阳性细胞减少,差异具有显著性(均P＜0.01);移植组和移植+HBO组两组间比较差异也具有显著性(P＜0.01)。d20时,与HIBD组比较,HBO组、移植组和移植+HBO组的TUNEL阳性细胞减少,差异均具有显著性(均P＜0.01),移植组和移植+HBO组两组间比较差异也具有显著性(P＜0.01)。 3.d20时免疫荧光染色结果显示植入细胞从侧脑室向周围脑实质广泛迁移,分布在脑室旁、脑白质通路、丘脑、皮层及海马等处,在迁移方式与分布上,移植组和移植+HBO组无明显差异,但移植+HBO组植入细胞的存活数量高于移植组,其差异具有显著性(P＜0.01);两组均可检测到hNSCs分化形成的神经元和星形胶质细胞和未分化的hNSCs,细胞形态与宿主细胞相似。 结论: (1)来源于人的胎脑NSCs移植至HIBD新生鼠脑后,植入细胞能存活、迁移并可分化为神经元及星型胶质细胞。 (2)hNSCs移植对HIBD大鼠受损脑组织有保护和修复作用。 (3)HBO治疗可通过促进植入细胞的存活、迁移和分化而增强NSCs移植的上述保护作用。
【图文】：

硕士学位论文第三部分附图第三部分附图图3一1图3一2汁粉阵一图3一3图3一4图3一l图3一2图3一3图3-4图3一5图3一6图3一5图3一620日龄HIBD组大鼠大脑TTC染色左侧大脑半球姜缩明显，右侧大脑半球染色呈红色，，左侧半球损伤处，染色呈白色。20日龄移植组大鼠大脑TTC染色左侧大脑半球轻度姜缩，可见软化灶。20日龄 HBO组大鼠大脑TTC染色左侧大脑半球轻度姜缩，可见软化灶。20日龄移植+HBO组大鼠大脑TTC染色左右脑半球大致对称，染色呈红色，未见软化灶及液化灶。20日龄HIBD组大鼠左侧大脑海马区HE染色(xlo倍)细胞排列散乱，神经元丢失明显。20日龄移植组大鼠左侧大脑海马区HE染色(xlo倍)细胞排列相对整齐，可见神经元丢失。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R459.6;R722.1

【参考文献】

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本文编号：2696320