【摘要】： 目的 新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)是新生儿时期的常见病，其致死、致残率很高，发病机制目前尚不清楚，一般多认为宫内缺氧、产时窒息所致的缺血性再灌注损伤是其主要的致病因素之一，，且缺氧、缺血后脑组织血运供应的改善与神经元功能的恢复密切相关。血管内皮细胞生长因子(VEGF)家族是一组近年来新发现的血管新生因子，包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E及胎盘生长因子(PlGF)六大成员，具有促进内皮细胞的增殖和迁移，细胞间相互粘附，排列成直线以及形成开放的腔样结构，增加血管的通透性，改造细胞外基质以适应血管生成，减轻神经元损伤，减轻脑水肿形成的作用。许多研究证明VEGF家族在成人脑缺氧缺血性疾病中发挥着重要作用，但有关VEGF在正常新生儿脑组织及HIE时的分布及表达情况的研究甚少。本研究通过新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型，动态观察正常生后7日龄新生大鼠及HIBD后不同时间脑VEGF-A mRNA和蛋白的表达及其分布情况，探讨VEGF-A在HIBD发病中的作用。 材料与方法 选用本院提供的正常生后新生7日龄Wistar大鼠为研究对象，采用Rice法制作HIBD模型。氧浓度为5％，氮气浓度为95％，持续时间20分钟。在缺氧缺血(HI)后不同时间点处死大鼠，取脑进行研究，同时设置对照组。具体研究内容：1．应用免疫组织化学染色检测VEGF-A蛋白在正常生后7日龄新生大鼠及HIBD后不同时间点的脑组织中的分布及表达情况：标本为脑组织石蜡切片，抗原行微波加热修复，进行SABC染色。2．应用原位杂交技术检测VEGF-A mRNA在正常生后7日龄新生大鼠及HIBD后不同时间点的脑组织中分布及表达情况。3．结果判定：400倍光镜下观察实验结果，阳性表达的细胞胞浆呈棕黄色，胞核为蓝色淡染。其中原位杂交的阳性表达主要在胞浆，少数胞核亦显色。4．统计学分析：400倍光镜下 每组每个时间点各观察6只大鼠，每只大鼠取相邻切片两张，每张切片取5 个高倍视野，经日本产的OLYMPUS BX51，rF数码相机采样，输人MetaMor- ph Imager匆stem version 4.6，将大脑皮质免疫组化和原位杂交的阳性细胞 数转化面积百分比，并计算其平均值(劝和标准差值(s)，所有数据以平均 值土表准差值(又士s)表示，两组间比较采用独立样本t检验，组内比较采用 配对样本t检验，P0.05有意义。 结果 1.在正常生后7日龄新生Wistar大鼠大脑皮质、脑髓质、海马、软脑 膜、室管膜、脑血管内皮细胞、脉络丛均有VEGF一A mRNA及蛋白呈低水 平表达，其中尤以脑皮质锥体细胞、海马DG区及血管内皮细胞最为明显。 生后第8d时vEGF一A的表达逐渐升高，gd时表达达高峰，以后逐渐降低， 并持续至生后第35d。 2.Hl可诱导VEGF一A mRNA及蛋白表达，Hl后Zh VEGF一A mRNA 及蛋白表达开始增加，并分别于Hl后12h、24h达高峰，以后逐渐降低，并持 续至HI后14d，班后21一28d时虽然VEGF表达仍高于正常对照组，但无 统计学意义。VEGF一A mRNA及蛋白表达的定位分析显示:HI后脑VEGF 一A mRNA及蛋白的表达部位与正常新生鼠脑基本相同，但表达强度增强， 持续时间延长。 结论 1.正常生后7日龄新生大鼠即有VEGF mRNA和蛋白的表达。 2.Hl可诱导VEGF一A mRNA及蛋白表达。 3.Hl后脑VEGF一A mRNA及蛋白的表达部位与正常新生鼠脑基本相 同，但表达强度增强，持续时间延长。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R722.1
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