Prkaa2、Ets-1对TGF-β1刺激肾小管上皮细胞纤维化的影响

发布时间：2020-06-14 14:59

【摘要】：目的:Prkaa2、Ets-1广泛存在于各种细胞中并参与多种生理和病理过程。研究显示,Prkaa2、Ets-1均可通过多种机制参与肾脏纤维化的发生、发展等生物过程,但没有涉及二者之间可能存在的联系。因此本实验通过检测Prkaa2和Ets-1在发生上皮间质转化的肾小管上皮细胞的表达情况,探讨Prkaa2和Ets-1作为肾脏纤维化防治的新靶点的可行性。研究方法:1、HK-2、NRK-52E细胞培养对照组为HK-2、NRK-52E细胞,均购自辽宁佰昊生物科技有限公司,未经任何处理。实验组一HK-2、NRK-52E细胞均加入TGF-β1诱导纤维化;实验组二HK-2、NRK-52E细胞均转染阴性对照病毒,并加入TGF-β1诱导纤维化;实验组三HK-2、NRK-52E细胞均转染Prkaa2低表达慢病毒,同样加入TGF-β1诱导纤维化。实验组细胞均在病毒转染成功后,再加入TGF-β1诱导纤维化,培养方法同对照组。2、q RT-PCR、细胞爬片及细胞免疫荧光染色及Western blot采用以上三种方法检测对照组、实验组一、实验组二及实验组三HK-2、NRK-52E细胞中Prkaa2和Ets-1的表达情况。3、统计分析所有的实验数据均以均值±标准差来表示,应用SPSS21.0统计软件进行统计学分析,采用2-△△ct法分析目的基因m RNA相对表达量变化,观察各组细胞目的基因表达量的变化趋势。结果:1、对照组及实验组HK-2、NRK-52E细胞培养在HK-2、NRK-52E传代后4小时,细胞贴壁约80%时,进行病毒转染,体外培养72小时后荧光显微镜下观察绿色荧光,转染效率达90%以上,实验组同时加入TGF-β1诱导纤维化。24小时后观察细胞形态由圆形、多边形转变为长梭形。2、q RT-PCR、免疫荧光染色及Western blot检测各组HK-2、NRK-52E中Prkaa2和Ets-1的表达情况通过对Prkaa2和Ets-1蛋白及m RNA的定性及定量检测,发现与正常对照组同时间点相比,实验组一HK-2、NRK-52E细胞中Prkaa2和Ets-1表达上调,并且差异有统计学意义(P0.05);与实验组二同时间点相比,实验组三HK-2、NRK-52E细胞中Prkaa2和Ets-1表达下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论:在TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化过程中,Prkaa2和Ets-1表达量明显上调,沉默Prkaa2基因后Ets-1表达也随之下调,HK-2、NRK-52E细胞的纤维化程度有所改善,Prkaa2和Ets-1有望成为肾脏纤维化防治的新靶点。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R726.9
【图文】：

中国医科大学硕士学位论文3 实验结果3.1 显著性差异基因的生物信息分析图 1 中 ERK/MAPK 通路被显著抑制，红色代表该基因在实验结果中表现为显著上调，绿色代表该基因在实验结果中表现为显著下调。该图直观地展示了实验结果中 Ets-1mRNA 在 ERK/MAPK 通路中的表达显著下调。

中国医科大学硕士学位论文3.3 免疫荧光染色结果3.3.1 HK-2、NRK-52E 细胞上皮间质转化鉴定，TGF-β1 可诱导肾小管上皮细胞发生形态学改变，由典型的圆形、多边形转变为梭形，提示 MET 过程。正常对照组细胞形态大多趋于圆形、多边形，TGF-β1 诱导组细胞形态更趋于梭形（图2）。TGF-β1 可诱导肾小管上皮细胞的胞浆内几乎都有间质细胞的特征性表型蛋白α-SMA 和 Vimentin 的表达，说明发生了上皮间质转化（图 3，图 4）。

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 高金祥;刁汇玲;王雅宁;董华;张晓敏;吕敏;贾振华;刘益涛;;维生素E对抗环磷酰胺对肾小管上皮细胞的毒性作用[J];滨州医学院学报;2016年02期

2 樊彩斌;温端改;侯建全;严春寅;周云;严向明;王兴东;;肾小管周围毛细血管损伤与肾小管上皮细胞凋亡的关系[J];苏州大学学报(医学版);2008年01期

3 方开云;石明隽;肖瑛;桂华珍;郭兵;张国忠;;原代肾小管上皮细胞的培养和鉴定[J];贵阳医学院学报;2008年02期

4 姚俊霞;吴人亮;;肾小管上皮细胞转分化与肾小管间质纤维化[J];中国现代医学杂志;2008年11期

5 李开龙,王建民,赵玲,张建国,何娅妮,杨聚荣,陈林;缺血再灌注损伤后肾小管上皮细胞的衰老演变及其意义[J];中华肾脏病杂志;2005年10期

6 梁培禾,靳风烁,岳明,江军,李彦峰;急性肾功能衰竭时肾小管上皮细胞bcl-2表达的意义[J];创伤外科杂志;2001年04期

7 姜傥,范瑾瑾,谭炳德,关伟明,董秀清;镉对离体肾小管上皮细胞的毒性及机理研究[J];中华预防医学杂志;1996年02期

8 王金泉,刘志红;细胞凋亡与肾小管上皮细胞损伤[J];肾脏病与透析肾移植杂志;1997年03期

9 姜傥，谭炳德，董秀清，关伟明;镉染毒后肾小管上皮细胞内氧自由基代谢与损伤之间关系的研究[J];中国工业医学杂志;1995年01期

10 孙宏夫;王建国;李兰英;周世英;张海萍;;移居高原狗再返平原的肾脏及碱性磷酸酶活性变化的电镜观察[J];电子显微学报;1988年03期

相关会议论文 前10条

1 刘燕;蒲蕾;杨立川;刘先蓉;樊均明;;洛伐他汀对转化生长因子-β诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化的影响[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年

2 朱加明;丁小强;张晓丽;刘春凤;;己糖胺通路活化介导肾小管上皮细胞表型和功能的改变[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年

3 于澄钒;黄晓波;许清泉;陈亮;胡卫国;王晓峰;;纳米细菌对肾小管上皮细胞的损伤作用及晶体滞留的影响研究[A];第十七届全国泌尿外科学术会议论文汇编[C];2010年

4 李健;李晓玫;王海燕;;低密度脂蛋白诱导的肾小管上皮细胞活化介导肾间质成纤维细胞生物学表型变化[A];中国细胞生物学学会第七次会议论文摘要汇编[C];1999年

5 梁东;刘华锋;姚翠微;刘海燕;;IL-18对人类肾小管上皮细胞凋亡和转分化的影响[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年

6 刘青娟;刘淑霞;段惠军;王丽晖;何宁;;糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转化与肝细胞生长因子的表达[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年

7 朱吉莉;丁国华;王学玉;;血管紧张素Ⅱ通过抑制蛋白激酶B诱导肾小管上皮细胞凋亡[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年

8 乔f^;陈香美;吴镝;丁瑞;师锁柱;谢院生;洪权;吕杨;王兆霞;尹忠;;衰老大鼠肾脏缺血/再灌注损伤中肾小管上皮细胞不同凋亡途径的研究[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年

9 杨晓;张春;邓安国;朱忠华;;结缔组织生长因子在肾小管上皮细胞细胞外基质积聚中的作用[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年

10 刘伟敬;叶霖;雷文娟;唐阳敏;吴洪銮;李秀纬;杨陈;许碧华;刘华锋;;尿蛋白诱导肾小管上皮细胞内溶酶体膜透化和溶酶体功能失调[A];中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2015年学术年会资料汇编[C];2015年

相关博士学位论文 前10条

1 胡玉杰;RGC-32通过G2/M检测点调控肾小管上皮细胞修复的分子机制[D];上海交通大学;2018年

2 姚芳;ETS2对肾小管上皮细胞EMT和肾纤维化的作用及其机制研究[D];南方医科大学;2019年

3 罗嘉伦;肾小管上皮细胞necroptosis的建立及其相关机制初探[D];南方医科大学;2017年

4 杨玲;缓激肽受体激活肾小管上皮细胞NF-κB信号通路介导三氯乙烯免疫性肾损伤机制研究[D];安徽医科大学;2018年

5 秦保龙;Ang Ⅱ/AT1R介导的肾小管上皮细胞氧化应激在肾草酸钙结石形成中的作用及机制[D];华中科技大学;2018年

6 沈孜颖;DJ-1减轻大鼠肾小管上皮细胞高糖缺氧复氧损伤的分子机制[D];武汉大学;2016年

7 李蔚;黄蜀葵花制剂调控ERK1/2-NLRP3炎症小体保护肾小管上皮细胞机理研究[D];南京中医药大学;2019年

8 姚春雷;尿酸促进糖尿病人群肾损害进展研究及ROS介导的NLRP3炎症小体活化参与尿酸对肾小管上皮细胞损伤机制研究[D];南京医科大学;2019年

9 武昊宇;MiR-155通过调控肾小管上皮细胞焦亡参与肾脏缺血再灌注损伤的机制研究[D];上海交通大学;2017年

10 张舒;RIPK3/TFEB通路在LPS介导的肾小管上皮细胞自噬流障碍中的研究[D];南方医科大学;2019年

相关硕士学位论文 前10条

1 赵璐;TLR2在糖尿病肾病肾小管上皮细胞上皮—间质转化中的作用[D];河北医科大学;2019年

2 杨紫依;丹参酮ⅡA对缺氧复氧损伤肾小管上皮细胞的作用及机制研究[D];重庆医科大学;2019年

3 田平平;高糖诱导肾小管上皮细胞miR-27a高表达促进肾纤维化的发病机制研究[D];贵州医科大学;2019年

4 马福江;Prkaa2、Ets-1对TGF-β1刺激肾小管上皮细胞纤维化的影响[D];中国医科大学;2019年

5 段玲弟;E2F1调控的自噬对高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT的抑制作用及白藜芦醇的干预研究[D];贵州医科大学;2019年

6 陈博涵;靶向抑制GSK3β对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响及其机制研究[D];郑州大学;2019年

7 胡欣梦;苦参碱通过增强自噬改善顺铂诱导的肾小管上皮细胞损伤的研究[D];广西医科大学;2019年

8 肖文;生松素对高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症因子表达的影响及其机制研究[D];西南医科大学;2019年

9 王彦哲;miR-30b/SNAIL调控DN肾小管上皮细胞EMT研究[D];上海交通大学;2017年

10 李德荣;内质网应激在草酸钙晶体诱导肾小管上皮细胞损伤中的作用及机制研究[D];广西医科大学;2019年

本文编号：2712949