隐性脊椎裂胎鼠支配腓肠肌的脊髓感觉及运动神经元定量研究

发布时间：2020-07-06 12:23

【摘要】： 目的神经管缺陷(neural tube defects NTDs)是常见的先天性畸形，也是世界卫生组织常规监测的先天性畸形之一。脊椎裂是神经管畸形中最常见的一种类型，其中包括显性脊椎裂和隐性脊椎裂。显性脊椎裂脊髓病变较重，常伴有严重的二便失禁和肢体的感觉运动功能障碍，很多患者需要终身治疗，明显影响生活质量。隐性脊椎裂脊髓病变较轻，有时合并轻度脊髓畸形和椎管内脂肪瘤，患儿刚出生时可以没有任何症状，但随时间推移个别患儿可出现脊髓栓系综合症表现，治疗非常困难，一些患儿即使经过积极的治疗(包括手术治疗)，仍然存在不同程度的无法纠正的功能障碍。关于隐性脊柱裂的脊髓病理改变和出现临床症状的机制目前尚不清楚。本试验通过应用维甲酸制作脊椎裂的动物模型，采用胎儿外科、显微外科和逆向神经示踪相结合的技术，探讨隐性脊椎裂胎鼠支配腓肠肌的感觉和运动神经元发育情况，为进一步研究隐性脊椎裂的发生机制及改进治疗方法打下必要的前期理论基础。实验方法 1、制作动物模型体重240-300g健康成熟未孕的Wistar大鼠，在确定怀孕的第10天，胃管灌入维甲酸135 mg／kg(橄榄油混悬液，40 mg／ml)的孕鼠为致畸组；经胃管注入等量的橄榄油的孕鼠作为对照组。 2、胎儿外科手术与显微注射在大鼠怀孕20天时，10％水合氯醛腹腔注射麻醉，应用胎儿外科显微手术和显微注射技术，在立体显微镜下用纤细玻璃针将5％荧光金注入胎鼠腓肠肌。 3、示踪神经元观察与统计显微注射的胎鼠存活24小时后，左心室穿刺主动脉灌注生理盐水冲洗后，4％多聚甲醛进行灌注固定；显微镜下观察胎鼠有无畸形，剪开腰骶段脊椎表面皮肤，观察腰骶段脊椎是否裂开，解剖并取出腰骶段脊髓。放入4％多聚甲醛中固定24小时，再放入20％蔗糖溶液中，24小时后连续冰冻横切片，荧光显微镜下观察并计数荧光金标记的感觉及运动神经元数目，通过数码照相系统将图片扫描并存储计算机硬盘内，观察对比对照组、给药后外观正常组和隐性脊椎裂组感觉和运动神经元的数目、形态和分布，并进行统计学分析。实验结果 1、各组感觉和运动神经元形态和分布的比较正常对照组(Ⅰ组)感觉和运动神经元位于腰骶段背根节部位，分布均匀有一定规律；给药后无畸形组(Ⅱ组)感觉和运动神经元分布均匀，形态和分布节段与正常相似；隐性脊椎裂组(Ⅲ组)感觉和运动神经元分布不均匀，较稀疏，分布节段减少而且不规律。 2、各组感觉和运动神经元数目的比较 Ⅱ组感觉神经元数目(1152±379个)较Ⅰ组(1357±393个)少，二者比较差异无显著性；Ⅲ组感觉神经元数目(481±188个)较Ⅰ组(1357±393个)和Ⅱ组(1152±379个)均少，与二者比较差异均有显著性(p＜0.05)。 Ⅱ组运动神经元数目(180±53个)较Ⅰ组(204±77个)少，二者比较差异无显著性；Ⅲ组运动神经元数目(106±34个)较Ⅰ组(204±77个)和Ⅱ组(180±53个)均少，与二者比较差异均有显著性(p＜0.05)。结论隐性脊椎裂胎鼠支配腓肠肌的感觉和运动神经元发育异常，感觉和运动神经元数目明显减少，分布异常，这可能与感觉和运动功能障碍等症状有关。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R726.5
【图文】：

胎鼠,横切片,椎骨,感觉神经元

正常对照组为I组，致畸组根据畸形情况分为二组，分别是给药后无畸形组为n组，隐性脊椎裂畸形组即给药后腰骸部外观正常，但锥体有裂开，且不合并肛门直肠畸形者为111组(图1，图2)。正常对照组(I组)有胎鼠10只，给药后无畸形组(II组)有胎鼠12只，隐性脊椎裂畸形组(m组)有胎鼠13只。I组感觉神经元位于腰骼段背根节部位，神经元分布均匀有一定规律，神经元数量为1357士393个;11组标记感觉神经元数量、分布与正常对照相似，分布均匀，分布节段与正常相似，神经元数量为1152士379个;111组标记感觉神经元数目明显减少，分布不均匀，较稀疏，分布节段减少而且不规律，神经元数量为481士188个。如表1，图3

脊椎裂,胎鼠,隐性,横切片

运动神经元,神经元,组标记,正常相

神经元分布均匀，分布节段与正常相似，神经元数量为180士53个;m组标记运动神经元数目明显减少，而且分布不均匀，较稀疏，分布节段减少而且不规律，神经元数量为106士34个。如表l，图4，图7，图8所示。

【参考文献】