神经干细胞在人胎脑及缺血缺氧性脑病中变化规律研究

发布时间：2020-07-11 07:46

【摘要】：第一部分人胎脑神经干细胞发育规律及其克隆实验研究 目的：探讨人胎脑发育中NSCs的分布、形态、生长方式以及数量等特点，并对不同胎龄不同部位的脑组织在体外分别进行NSCs培养，同时鉴定其增殖及分化潜能，最终探明胎脑发育中NSCs的变化规律，为进一步在体内外进行调控NSCs的增殖分化机制研究以及临床应用NSCs治疗神经系统退行性疾病提供实验及理论依据。 方法：收集胎龄16～36w的自愿水囊引产胎儿90例作为研究对象，按胎龄16w，20w，24w，28w，32w，36w分成6组，每组15例；每例研究对象分别取海马、纹状体、室下区、额叶、颞叶、枕叶、顶叶等7个部位的脑组织作为实验材料。采用原位杂交、免疫组织化学以及光镜技术分别对6组7个部位胎脑组织NSCs的分布、形态、生长方式以及数量进行检测。采用包含bFGF及EGF的无血清培养基和单细胞克隆技术，分别从6组7个部位胎脑组织中分离出NSCs，并在体外进行培养、传代、分化，同时应用免疫荧光染色技术对培养的NSCs及其分化的细胞进行鉴定。 结果：6组7个部位胎脑组织均存在NSCs，NSCs包括大小圆形、大小椭圆形、梭形、星形、三角形、多角形等细胞形态。可观察到两两对称和不对称分裂的NSCs、2-8个NSCs形成的集落、群状、簇状等NSCs生长方式，群状、簇状分布的NSCs好似群状迁移的NSCs群也好似NSCs发生中心，有的NSCs突起伸向别的细胞，形成突触联系。不同胎龄不同部位NSCs在分布部位、形态、生长方式以及数量等方面存在一定差异。不同胎龄同一部位的NSCs数量随着胎龄的增加而减少，同一胎龄 不同部位的NSCs数量自海马、室下区、纹状体、额叶、颖叶、顶叶以 及枕叶依次减少，且相互之间存在显著性差异。星形NSCs呈Nestin和 CFAP双表达。在28w胎龄组的海马及室下区、32w和36w胎龄组的海 马、室下区及纹状体等部位均存在Nestin和CD34蛋白双表达阳性NSCs。 在16w，20w，24W，28w和32w胎龄组的7个部位均存在Nestin和CD133 蛋白双表达阳性NSCs。6组7个部位的脑组织在无血清培养基中培养时 细胞呈悬浮状态生长，形成神经球，该细胞具有连续克隆能力，可传代 培养，表达神经巢蛋白抗原;在含血清培养基中培养时NSCs可被诱导 分化，分化后的细胞分别表达神经元细胞、星形胶质细胞和少突胶质细 胞的特异性抗原。各胎龄组、各部位分别培养的NSCs在细胞形态、增 殖和多分化潜能方面无明显差别。 结论:胎龄16~36w人胎脑海马、室下区、纹状体、额叶、颜叶、 顶叶等部位均存在NSCs。冻存细胞和水囊引产后48h内分离的原代细胞 均能培养出NSCs，其原代NSCs与死亡时间呈负相关;bFGF和EGF是 NSCs存活和增殖的关键生长因子。Nestin和CD133是人胎脑NSCs的特 征性标记物，CD34可能是人胎脑晚期NSCs的特征性标记物。不同胎龄 同一部位人胎脑NSCs在分布部位、形态、生长方式以及数量等方面存 在差异，同一胎龄不同部位人胎脑NSCs在分布部位、形态、生长方式 以及数量等方面同样存在差异。人胎脑室下区及海马齿状回是NSCs的 发源地，但人胎脑可能存在室下区及海马齿状回以外的NSCs生发中心。 人胎脑NSCs仍然是移植的重要材料来源。人胎脑在体NSCs的形态多样 性与体外培养NSCs的形态单一性不一致的现象提示，在体调控自身 Nscs的增殖和分化可能是治疗疾病另一条更有前景的道路。
【学位授予单位】：第一军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R722.121
【图文】：

部位图34:6组人胎脑7个部位Nestin蛋白阳性NSCs检出率比较六、6组7个部位胎脑组织免疫组化双标染色结果1.Nes血和GEAp蛋白双标染色结果通过对90例胎脑7个部位脑组织细胞进行免疫组化双标染色，检测和鉴定NSCs以及星形胶质细胞发现，研究对象的所有检测部位均能检测到表达两种蛋白的3种细胞，即:单纯表达Nestin的NSCS，同时表达Nestin和GFAP的NSCs，单纯表达GFAp的星形胶质细胞。各部位星形胶质细胞的数量较多，NSCs只在检测部位的某区域呈散在、集落样、簇状以及群状等生长方式存在。神经干细胞的形态呈多样性，大小不一，并且随部位、胎龄的不同存在较大的差异。Nestin和GFAP双表达的NSCs主要呈星形，大小不一，并且从颜色的深浅看出，GFAP在其表达的不同NSCs中，也存在表达强度不同，同时，可看到GFAP双表达NSCs的对称分裂象，在其分布部位、形态、大小、生长方式等方面与免疫组

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1 林玲;郑志z

本文编号：2750149