促红细胞生成素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后BrdU、Nestin表达的影响

发布时间：2020-07-18 18:36

【摘要】：目的研究促红细胞生长素(erythropoietin, EPO)早期对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后(hypoxic ischemic brain damage, HIBD)海马齿状回颗粒下带(SGZ)5-溴脱氧尿嘧啶(5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU)和海马齿状回DG区巢蛋白(Nestin)表达变化的影响,从神经细胞再生分化和行为学两方面探索不同剂量EPO早期对新生鼠HIBD的保护作用,为临床应用EPO治疗新生儿缺氧缺血性脑病选择合适的治疗剂量提供实验依据。 方法新生7日龄Wistar大鼠160只随机分为HIBD生理盐水对照组、假手术组、EPO治疗Ⅰ组、EPO治疗Ⅱ组、EPO治疗Ⅲ组,每组32只,通过结扎并剪断7日龄新生大鼠右侧颈总动脉,吸入8%02+92%N2的低氧气源2小时制备新生鼠HIBD模型。EPO治疗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别于缺氧缺血完成后即刻注射rhEPO5u/g、10μ/g、15u/g, HIBD对照组即刻注射生理盐水0.5ml/只,连续14天,除用于Morris水迷宫(Morris water maze)行为测定的大鼠外,所有动物分别于处死前1天注射BrdU。各组分别于术后14天、21天、28天不同时点断头取脑组织。用免疫组织化学染色法和计算机图像分析技术检测各组大鼠不同时点海马SGZ区BrdU和DG区Nestin表达变化及HE染色观察脑组织病理变化,通过Morris水迷宫实验观察五组大鼠的学习记忆功能。 结果1.海马SGZ区BrdU表达：BrdU阳性细胞数随着新生大鼠的脑发育成熟而减少,同组大鼠BrdU表达每后一时点低于前一时点,差异均有统计学意义(P0.05)；五组大鼠同一时点BrdU表达差异有统计学意义(P0.05),其中EPO干预组表达最多,HIBD对照组表达次之,假手术组表达最少(术后14天、21天有差异,术后28天则无差异)；EPO治疗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组各个时点海马SGZ区BrdU表达随着剂量增加呈现逐渐减少趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。2.海马DG区Nestin的表达：同组大鼠DG区Nestin的表达随着时相的延长而减少,差异有统计学意义(P0.05)；各组大鼠同一时相Nestin表达比较,差异有统计学意义(P0.05),EPO干预组表达最多,HIBD对照组表达次之,假手术组表达最少(术后14天、21天有差异,术后28天则无差异)；EPO治疗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组海马SGZ区BrdU表达差异无统计学意义(P0.05)。3.Morris水迷宫行为测定：①学习能力：五组大鼠逃逸伏期总体比较差异有统计学意义(P0.05),其中假手术组最短,EPO治疗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组次之,HIBD对照组最长。②记忆能力：HIBD对照组穿环指数与假手术组、EPO治疗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组间差异均有统计学意义(P0.05),而假手术组与EPO治疗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组间比较,差异无统计学意义(P0.05),EPO治疗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组间相互比较,差异亦无统计学意义(P0.05)。 结论1、外源性给予EPO治疗新生鼠HIBD后可促进中枢神经系统中BrdU、Nestin的表达,促进受损神经细胞增殖、再生,在缺氧缺血性脑损伤中发挥一定的保护作用； 2、EPO早期治疗可改善新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后的学习和记忆功能；3、缺氧缺血性脑损伤可刺激新生动物脑内的神经干细胞增殖、分化和再生：4、通过对本试验的选择的三种EPO实验剂量对新生大鼠HIBD的影响结果表明,随着EPO剂量的增加,反映新生大鼠HIBD后神经细胞再生的指标表达呈现下降趋势,增加EPO剂量并不能增强脑保护作用。
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R722.1
【图文】：

分:结扎对侧前肢屈曲，侧推抵抗力弱，转圈试验阴性;3分:结扎对侧前肢屈曲，侧推抵抗力弱，转圈试验阳性。3分者为成功模型，进行实验。2.2.2脑组织HE染色病理改变(见附图1一5):假手术组大鼠海马细胞层次分明，胞核圆形、淡染，核仁明显;对照组大鼠神经细胞变性、坏死，胶质细胞增生，海马锥体细胞层次紊乱、排列松散，部分神经细胞固缩、胞浆深染、核浓缩，结构不清;治疗组脑组织神经细胞变性、坏死较对照组减轻。图1假手术组术后海马cAI区(HE染色X400)神经细胞无变化、坏死，海马锥体细胞层次分明，排列紧密。 Figure1HIPPoealnPalCAIregionofthesham operationgrouP(HEX400)，几 ehiPPoeamPusP皿a而 daleelllayersweremultilayer， theeells arrangedregularly

2.1.1各组实验动物术后表现:H工BD治疗组和H工BD对照组在术后2h内少动，呼吸稍急促。3一4d后左侧前肢屈曲，侧推抵抗力弱，转圈试验阳性，3w左右好转，可正常活动。2.2判断动物模型成功的标准采用运动功能评价2.2.10分:向地面伸展双前肢，未见行为异常;1分:结扎对侧前肢持续屈曲;2分:结扎对侧前肢屈曲，侧推抵抗力弱，转圈试验阴性;3分:结扎对侧前肢屈曲，侧推抵抗力弱，转圈试验阳性。3分者为成功模型，进行实验。2.2.2脑组织HE染色病理改变(见附图1一5):假手术组大鼠海马细胞层次分明，胞核圆形、淡染，核仁明显;对照组大鼠神经细胞变性、坏死，胶质细胞增生，海马锥体细胞层次紊乱、排列松散，部分神经细胞固缩、胞浆深染、核浓缩，结构不清;治疗组脑组织神经细胞变性、坏死较对照组减轻。

图3“PO治疗组I海马CA‘区(H“染色x400)神经细胞部分变性、海马锥体细胞层次清楚，排列较松散。Fioe3Hi，eamnaleAlre乡onloftheEPotreated1grouPofHIBD(HEX400)，The图4EPO治疗n组海马CAI区(HE染色x400)神经细胞部分变性、海马锥体细胞层次清楚，排列较松散。Figure4HIPpoeamPalCAIregionoftheEPOtreated11grouPofHIBD(HEX400)，The

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本文编号：2761274