哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素及其受体的表达以及布地奈德、卡介苗干预的影响

发布时间：2020-08-08 13:09

【摘要】： 目的: 观察哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)及其受体(TSLPR)的表达以及布地奈德混悬液(BUD)、卡介苗(BCG)干预对其表达的影响,探讨TSLP、TSLPR与哮喘的关系,为哮喘的防治提供新的思路。方法: 1.40只雌性昆明小鼠随机分成4组:哮喘组、BUD干预组、BCG干预组、正常对照组,每组10只。 2.哮喘组:昆明小鼠于第1、7、14天分别腹腔内注射0.01%OVA和10%氢氧化铝混悬液0.2ml进行致敏,第21天起,雾化吸入2%OVA生理盐水溶液5ml进行激发,每天1次,每次30分钟,连续7天。 3.BUD干预组:致敏和激发方法同哮喘组,在雾化吸入OVA前1h予以BUD生理盐水溶液5ml(含BUDlmg)雾化吸入20～30min。 4.BCG干预组:致敏和激发方法同哮喘组,于OVA致敏前5d、3d、1d分别以BCG0.025mg皮内注射干预。 5.正常对照组:昆明小鼠以生理盐水代替OVA致敏、激发。 6.末次激发24h后收集肺泡灌洗液(BALF)、外周血、肺组织及脾组织。肺组织切片行HE染色观察病理改变,并用免疫组织化学方法判断肺组织TSLP、TSLPR的表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定BALF中IL-4、肺组织和脾组织中TSLP和TSLPR以及血清TSLP的表达。实时荧光定量PCR法检测肺组织中TSLP mRNA和TSLPR mRNA的表达。结果: 1.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠肺组织TSLP阳性细胞的平均光密度分别为(0.277±0.009)、(0.064±0.015)、(0.160±0.009)、(0.004±0.001)。四组间存在显著差异(P＜0.01)。哮喘组明显高于正常对照组(P＜0.01);BUD干预组和BCG干预组明显低于哮喘组(P＜0.01):BUD干预组和BCG干预组明显高于正常组(P＜0.01);BUD干预组明显低于BCG干预组(P＜0.01)。 2.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠肺组织TSLPR阳性细胞的的平均光密度分别为(0.413±0.030)、(0.040±0.004)、(0.168±0.008)、(0.006±0.001)。结果与肺组织TSLP阳性细胞的平均光密度比较结果相似。 3.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠BALF中IL-4的表达水平分别为(244.200±4.601)pg/ml、(220.600±3.034)pg/ml、(224.900±2.930)pg/ml、(219.200±2.480)pg/ml。四组间存在显著差异(P＜0.01)。哮喘组明显高于正常对照组(P＜0.01);BUD干预组和BCG干预组明显低于哮喘组(P＜0.01);BUD干预组和BCG干预组虽高于正常对照组,但差别无统计学意义(P＞0.05);BUD干预组与BCG干预组比较,差别无统计学意义(P＞0.05)。 4.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠肺组织TSLP的表达水平分别为(4.221±0.115)ng/ml、(3.899±0.071)ng/ml、(3.8980±0.046)ng/ml、(3.621±0.129)ng/ml。结果与BALF中IL-4比较结果相似。 5.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠肺组织TSLPR的表达水平分别为(17.160±0.157)ng/ml、(16.460±0.209)ng/ml、(15.740±0.273)ng/ml、(15.860±0.285)ng/ml。结果与BALF中IL-4比较结果相似。 6.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠脾组织TSLP的表达水平分别为(5.467±0.074)ng/ml、(5.096±0.077)ng/ml、(5.101±0.161)g/ml、(4.975±0.073)ng/ml。结果与BALF中IL-4比较结果相似。 7.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠脾组织TSLPR的表达水平分别为(20.901±0.421)ng/ml、(18.280±0.159)ng/ml、(18.840±0.273)ng/ml、(17.930±0.156)ng/ml。四组间存在显著差异(P＜0.01)。BCG干预组明显高于正常对照组(P＜0.05)。其余结果与BALF中IL-4比较结果相似。 8.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠血清TSLP的表达水平分别为(1.611±0.204)ng/ml、(0.484±0.061)ng/ml、(0.166±0.045)ng/ml、(0.336±0.076)ng/ml。四组间存在显著差异(P＜0.01)。哮喘组明显高于正常对照组(P＜0.01);BUD干预组和BCG干预组明显低于哮喘组(P＜0.01);BUD干预组和BCG干预组与正常对照组比较,差别无统计学意义(P＞0.05);BUD干预组明显高于BCG干预组(P＜0.01)。 9.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠肺组织TSLP mRNA的相对表达水平分别为(8.510±1.657)%、(1.756±0.518)%、(3.950±1.031)%、(0.999±0.204)%。结果与BALF中IL-4比较结果相似。 10.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠肺组织TSLPR mRNA的相对表达水平分别为(8.601±1.847)%、(0.972±0.295)%、(3.236±0.538)%、(1.848±0.394)%。四组间存在显著差异(P＜0.01)。BUD干预组明显低于BCG干预组(P＜0.01)。其余结果与BALF中IL-4比较结果相似。结论: 1.哮喘小鼠血清TSLP、肺组织和脾组织TSLP、TSLPR及肺组织TSLP mRNA、TSLPR mRNA的表达均增高。TSLP、TSLPR在哮喘的发病机制中起重要作用。 2.BUD、BCG可明显抑制哮喘小鼠TSLP和TSLPR的表达,为BUD、BCG防治哮喘提供了新的理论依据。 3.TSLP、TSLPR在哮喘的发生发展中起重要作用,可能成为治疗哮喘的潜在靶点。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R725.6
【图文】：

哮喘,肺组织,病理切片

哮喘组小鼠肺组织切片HE染色见支气管及肺泡内粘液分泌增多，周围有较多炎性细胞(淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等)浸润，支气管管壁变厚，气道变窄，气道上皮受损肿胀，基膜轻度增厚、细支气管平滑肌轻度增生等表现(图1);BUD干预组、BCG干预组小鼠肺组织及支气管炎症改变较轻，炎性细胞较哮喘组减少，气道、气道上皮损伤较轻(图2、图3);正常对照组小鼠肺组织切片HE染色可见支气管形态规则，上皮完整，细支气管、肺泡隔及血管壁周围未见炎性细胞浸润(图4)。图1哮喘组肺组织病理切片 (x200倍)图 2BUD干预组肺组织病理切片(x200倍)

肺组织,病理切片

促、腹肌抽搐、二便失禁等症状，严重者呼吸减慢或节律不齐，动作迟缓或俯伏不动，四肢瘫软、反应迟钝，BUD干预组及BCG千预组较哮喘组比较上述症状相对减轻，正常对照组无上述症状。二、各组小鼠肺组织病理变化哮喘组小鼠肺组织切片HE染色见支气管及肺泡内粘液分泌增多，周围有较多炎性细胞(淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等)浸润，支气管管壁变厚，气道变窄，气道上皮受损肿胀，基膜轻度增厚、细支气管平滑肌轻度增生等表现(图1);BUD干预组、BCG干预组小鼠肺组织及支气管炎症改变较轻，炎性细胞较哮喘组减少，气道、气道上皮损伤较轻(图2、图3);正常对照组小鼠肺组织切片HE染色可见支气管形态规则，上皮完整，细支气管、肺泡隔及血管壁周围未见炎性细胞浸润(图4)。

病理切片,肺组织,哮喘

图3BCG干预组肺组织病理切片(x200倍)图4正常对照组肺组织病理切片(X200倍)三、各组小鼠BALF中IL一4的表达哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠BALF中IL一4的表达水平分别为(244.20肚4.601)pg/ml、(220.60肚3.034)pgiml、(224.90肚2.930)pg/ml、(219.20肚2.480)pg/ml。四组间存在显著差异(F=ll.876，P=0.000)。哮喘组明显高于正常对照组(t=4.783，P=O.OOO);BUD干预组明显低于哮喘组(t=4.282，P=0.001);BCG干预组明显低于哮喘组(t=3.538，尸=0.002);BUD干预组虽高于正常对照组，但差别无统计学意义(拼0.357，尸=0.725);BCG干预组虽高于正常对照组，但差别无统计学意义(t=1.485，P=O.155);BUD干预组与BCG干预组比较，差别无统计学意义(t=l.olg，P=0.322)。见表l，图5。表1各组小鼠BALF中lL一的检测结果(p创mD

【参考文献】