褪黑素对病毒唑抗呼吸道合胞病毒的增强作用

发布时间：2020-09-14 10:45

　　目的探索褪黑素增强病毒唑抗呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus, RSV)感染的作用及其部分机制;观察褪黑素(MT)对感染鼠的免疫功能影响,为褪黑素可能应用于临床提供理论依据。方法①体外试验中,采用微量细胞病变抑制法,通过四甲基偶氮唑盐比色法(MTT),观察两种药物单独使用以及联用时分别对RSV在人喉癌上皮细胞(Hep-2)所致细胞病变抑制效应,按Reed-muench法计算出药物致细胞半数中毒浓度(TD50)、半数50%病变抑制的药物浓度(IC50)和治疗指数(TI),用统计学及金正均法q值判断两药的相互作用,以及MT在不同给药时间时病毒唑对RSV的抑制作用。②体内试验中,以呼吸道合胞病毒滴鼻感染小鼠建立病毒性肺炎模型,褪黑素和病毒唑进行灌胃给药。实验分为正常对照组、病毒模型组、病毒唑组(17.5、35、70mg/kg 3个剂量组)、褪黑素组(5、10、20mg/kg 3个剂量)、褪黑素和病毒唑联合组(9个剂量组)。分别从小鼠眼球取血,收取血清。断颈处死小鼠,取肺组织,无菌取脾脏。观察褪黑素和病毒唑单独使用以及联合使用时对小鼠病毒性肺炎的治疗作用;用刀豆蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)作为诱导剂,MTT法检测小鼠脾脏淋巴细胞转化功能;以YAC-1细胞作为靶细胞用MTT法检测小鼠NK细胞活性;采用SRBC的定量溶血测定法,观察褪黑素对小鼠抗体形成细胞能力的影响;ELISA法检测血清样品中IFN-γ水平;将右肺中叶取出后立即用10%的福尔马林固定,常规切片HE染色后在光镜下观察。结果一、体外实验 ①褪黑素和病毒唑对Hep-2细胞的TD50分别为2655±235 mg/L和3874±356mg/L。 ②病毒唑对呼吸道合胞病毒具有抑制作用,且有浓度依赖性关系,其IC50为280±46mg/L,TI为9.48±3.8。③两种药物联合使用时,对病毒的抑制作用明显增加,褪黑素25、50mg/L分别与病毒唑50、100、200mg/L联合使用时,q值均1.15,呈现协同作用。统计学处理结果均显示两种药物间存在交互作用。褪黑素能增强病毒唑的抑制RSV感染作用。 ④MT同时处理或者预处理,RSV对病毒唑的敏感性均提高,而且MT预处理24h的效果更优于同时处理。二、体内试验 ①RSV感染鼠治疗结果显示,病毒唑可以明显降低小鼠肺指数值,其有效浓度为17.5 mg.kg-1,随着药物剂量增加,疗效增强。 ②经褪黑素大、中、小三个剂量组(20、10、5mg/kg)的处理,其小鼠脾脏淋巴细胞转化功能、NK细胞活性、抗体形成细胞能力与模型组相比,具有统计学差异(P0.05)。褪黑素能够明显提高小鼠淋巴细胞转化功能、NK细胞活性以及抗体形成细胞能力。 ③褪黑素能提高淋巴细胞分泌IFN-γ的能力,并呈现剂量依赖性。 ④病理学结果显示,病毒唑能减轻肺组织的炎性损伤,但褪黑素联合应用能够明显减轻肺组织的炎性损伤。结论 ①体外抗病毒实验表明,病毒唑能够抑制RSV细胞病变,且具有浓度依赖性关系。褪黑素能够促进病毒唑的抗病毒能力,两者联合运用较病毒唑单独使用具有更好的效果。 ②体内抗病毒实验表明,病毒唑对感染鼠的病毒性肺炎具有一定的抑制作用,褪黑素能够增强病毒唑的抗病毒作用。两者联合后可以增强抑制RSV的作用,达到优势互补的效果。 ③褪黑素能够增强病毒性肺炎模型小鼠的淋巴细胞转化功能、NK细胞活性以及抗体形成细胞能力,并且提高血清中的IFN-γ水平,从而增强机体的免疫功能,促进病毒唑抗呼吸道合胞病毒的作用。
【学位单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2007
【中图分类】：R725.6

【参考文献】