胰岛素对内毒素血症幼鼠肝损伤保护作用的实验研究

发布时间：2020-09-17 10:48

　　 目的通过建立幼鼠内毒素血症肝损伤的动物模型并予以胰岛素干预,研究胰岛素对LPS诱导的幼鼠肝细胞释放炎症因子TNF-α和IL-6的影响,以及TNF-α和IL-6与NF-κB活化水平的关系,了解胰岛素是否对内毒素血症所致的幼鼠肝损伤具有保护作用,并探讨其作用机制。 方法18日龄wistar幼鼠72只随机分正常对照组(腹腔注射生理盐水,n=8)、内毒素血症组(LPS组,腹腔注射LPS,n=32)和胰岛素治疗组(腹腔注射LPS+皮内注射胰岛素,n=32)。LPS组和胰岛素治疗组LPS(5mg/kg)腹腔注射建立幼鼠内毒素血症模型,胰岛素组同时给予胰岛素(4IU/kg)皮内注射;正常对照组腹腔注射等容量生理盐水;LPS组和胰岛素治疗组根据建模后取标本时间的不同分2h、6h、12h、24h四个亚组,每个亚组8只,取肝脏制备石蜡切片和组织匀浆,普通光镜、电镜观察各组肝细胞的病理改变情况,ELISA法测定肝组织匀浆TNF-α和IL-6的含量,快速血糖仪检测幼鼠血糖浓度,赖氏法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)的浓度,免疫组化法检测肝组织NF-κB的活化水平,并对结果进行统计学分析。 结果:1、组织学改变:光镜下正常对照组肝细胞完整,结构清晰,未见变性和坏死;LPS组肝组织损伤较明显,肝细胞出现肿胀、空泡样变性、汇管区有炎症细胞浸润,点片状、大片状坏死等,以6h最明显,损伤等级评分与正常对照组比较差异有统计学意义(p＜0.05),胰岛素治疗组肝组织损伤均轻于LPS组,6h损伤等级评分与LPS组比较差异有统计学意义,p＜0.05;电镜下正常对照组内质网光滑,核膜完整,染色质均匀分布于核内;LPS组见胞浆疏松,线粒体肿胀,脊断裂或消失,内质网扩张,核膜出现切迹,染色质浓缩在核周边,核仁碎裂,损害以6h组最为明显;胰岛素治疗组各时点肝组织病理损害较LPS组轻。2、血糖水平:胰岛素治疗组在2h和6h比正常对照组、LPS组低(p＜0.05),12h、24h各组之间差异均无统计学意义(p＞0.05)。3、ALT水平:2h各组之间差异无统计学意义(p＞0.05),LPS组6h、12h及24h均较正常对照组高(p＜0.05),胰岛素治疗组在6h、12h、24h均较LPS组降低(p＜0.05),但仍高于正常对照组。4、肝细胞NF-κBp65蛋白的表达:LPS组核阳性细胞百分比较正常对照组高,差异有统计学意义(p＜0.05);胰岛素治疗组2h、6hNF-κBp65核阳性细胞百分比均明显低于LPS组(p＜0.05)。5、肝组织TNF-α、IL-6水平:在6h、12hLPS组高于正常对照组和胰岛素治疗组,差异有统计学意义(p＜0.05)。 结论1.内毒素血症可引起肝损伤,导致肝细胞的破坏和肝功能的改变,说明肝脏是重症感染的受累器官之一;2.NF-κB的活化参与了内毒素血症肝损伤的发生,其机理可能是通过介导炎性介质TNF-α和IL-6的合成使肝细胞发生炎性损伤;3.胰岛素对内毒素血症肝损伤有保护作用,其机理可能是通过降低NF-κB的活化,减少TNF-α和IL-6的合成和释放,降低应激反应时期的血糖而起作用,但确切的机制有待进一步研究。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2009
【中图分类】：R720.597
【部分图文】：

1.25士0.463*注:与正常对照比较*p<0.05;与LPS组比较#p<0.05图1一1:300250轰1几;万i姐寻一砚口LPS‘;自脚~_200

血糖水平胰岛素治疗组在Zh和6h低于正常对照组和LPS组，差异有统计学意义(p<0.05)，12h、24h各组之间差异无统计学意义(p>0.05)(见表2、图3A);ALT水平在Zh各组之间差异无统计学意义(p>0.05)，LPS组6h、12h、24h均高于正常对照组，差异有统计学意义(p<0.05);胰岛素治疗组12h、24h均低于LPS组，差异有统计学意义(p<0.05)(见表3、图3B)。表2幼年大鼠各组血糖的比较(x士S)细l一一一一一一一一一一卫!丝卫卫里卫二卫二一一一一~—一一一一2h6h12h24h正常对照组LPS组胰岛素治疗组 5.3士 1.07 6.0士0.50 2.1士1.50*# 4.8士2.23 1.5士0.83*# 5.1士 1.51 5.9士1.18 5.2士1.39 5.0士1.90表3幼年大鼠各组ALT的比较(x士S)组别ALT(u/1)2h6h12h24h正常对照组LPS组胰岛素治疗组15.8士2.6234.5士23.7225.4士16.1552.7士26.17*33.2士14.9975.9士28.48* 51.5士13.07*#49.3士23.86*33.8士1.67#注:*与NS组比较尸<0.05;#与LPS组相同时间点比较尸<0.05。

但仍高于正常对照组;胰岛素治疗组各时间点NF一 KBp65核阳性细胞百分比均高于正常对照组，但Zh、6h低于LPS组，差异有统计学意义(p<0.05)(见表4、图4一l、图4一2)。表4幼年大鼠各组肝细胞NF一KBP“的变化(x士S)组别一一一一一一一一一一业巡些燮壑些些卫燮一一一一一12h24h正常对照组LPS组胰岛素治疗组 2.52士0.5126.66士2.30*20.30土1.61*#19.94士3.77*16.22士2.58*12.78士6.70*13.38土2.17*15.12士5.98*12.66士2.28*注:*与NS组比较p<0.05:#与LPS组相同时间点比较p<0.05。图4一l:3000扭}别门一拱m因目25‘00LpS-彭之冬2000，500，000承的gd山"己Nu门.盏 5.00000】】】 )))】】 lllll{{{lll鬓 鬓鬓鬓鬓鬓鬓鬓鬓鬓鬓鬓鬓 ;;;;;;;;;;;;;;;鬓 鬓鬓鬓鬓鬓鬓鬓鬓鬓 崖 崖 崖 崖 崖崖 崖 崖崖倒 倒 倒倒倒倒倒 案 案 案 案 案案 案案案案案案案案案案案案案案 案案案理理 ‘ ‘ ‘ ‘ ‘‘ ‘‘J气 气下~刀不爪，两 两 两 两 两 ;;;;;;;;;;;;;;;.‘刀 刀.势附.~」 」 」 」 」 羹 羹 羹 羹 羹羹 羹羹 羹r贾匆曰户，

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本文编号：2820623