脆弱拟杆菌抑制阪崎克罗诺杆菌致坏死性小肠结肠炎效果评价及机制研究

发布时间：2020-10-15 04:55

　　 1.研究背景阪崎克罗诺杆菌(Cronobactersakazakii,CS)是一种引起婴幼儿坏死性小肠结肠炎(Necrotizingenterocolitis,NEC)的革兰阴性无芽孢杆菌。肠道菌群失调、肠黏膜屏障的破坏和细胞死亡增加与CS致NEC的发生发展密切相关。益生菌具有抑制致病菌生长、维持肠道菌群平衡、促进肠黏膜和免疫细胞发育等功能,已成为NEC防治的研究热点和发展趋势。前期从健康婴儿粪便中分离筛选到一株无毒脆弱拟杆菌(Bacteroidesfragilis)(ZY-312),具有治疗肠道炎症、腹泻等功能。本研究将开展ZY-312能否防治CS致NEC的发生,并初探其防治机制。2.研究方法(1)建立基于人结肠腺癌Caco-2的体外肠屏障模型,明确ZY-312能否抑制CS对肠屏障的损伤及其保护作用机制。(2)建立基于“CS定植肠黏膜-破坏肠屏障-引发NEC”发病过程的新生大鼠模型,利用ZY-312干预,评价ZY-312防治CS致新生大鼠NEC感染的效果。(3)探讨ZY-312防治CS致NEC感染的作用机制:1)明确ZY-312对新生大鼠肠屏障的保护作用;2)检测ZY-312对CS致新生大鼠肠组织炎症小体NLRP3及细胞焦亡的调控;3)明确ZY-312是否抑制CS诱导的细胞凋亡。3.研究结果(1)体外研究结果显示ZY-312能抑制CS降解Caco-2分泌的黏蛋白,抑制CS的黏附和侵袭,减轻CS对肠上皮细胞紧密连接蛋白的破坏。(2)体内研究结果显示ZY-312能有效预防新生大鼠CS感染致NEC,降低死亡率。(3)ZY-312防治CS致NEC的机制包括:1)ZY-312可增强小鼠肠屏障功能,包括:①增加肠道表层黏蛋白、细胞紧密连接蛋白的表达和降低肠道的通透性来增强新生大鼠肠机械屏障功能;②增加肠道表层的免疫球蛋白A、减少促炎因子的释放,增强新生大鼠肠免疫屏障功能;③通过改善肠道菌群的丰度,增加拟杆菌的数目,减少致NEC变形菌门的数量,实现微生物屏障功能的修复。2)ZY-312可抑制CS激活的炎症小体NLRP3相关蛋白的表达,减少促炎因子IL-1β的释放,缓解炎症。3)ZY-312可抑制CS诱导的肠上皮细胞发生焦亡和凋亡,减少细胞程序性死亡,防治NEC的发生。4.结论新生儿早期肠屏障功能的不完善和致病菌导致的细胞死亡增加是NEC发生的主要原因。本研究引入二代益生菌脆弱拟杆菌ZY-312开展防治CS引起的NEC,结果表明ZY-312能通过调节肠道菌群、修复肠屏障、抑制炎症小体NLRP3的活化,减少细胞程序性死亡(焦亡和凋亡),调控NEC。本研究为脆弱拟杆菌ZY-312的应用奠定理论基础,并为细菌性NEC的防治寻找新的治疗靶点。
【学位单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R725.7
【部分图文】：

修复肠上皮屏障，并改变肠道代谢产物，从而改善ＭＩＡ症状（图１－３）。??Ｍａｔｅｒｎａｌ?ｉｍｍｕｎｅ?ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ?Ｓａｃｔｅｒｏ／ｃｔｅｓ?ｆｒａｇｒ／７／ｓ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??—?—－?，謂?一一?Ｚ??ｌｕｍｅｎ?＾?ｄｙｓｔｔｉｏｓｉｓ?ａｌｔｅｒｅｄ??ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ??ｒｙｒ?＂＾ｒ?＾?＾??｜Ｖ．矜凡ＩＶ?ＰＪＶ錢置上．．錢Ｊ｜??ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ?〇?ｄｉｍｉｎｉｓｈｅｄ?ｃｐｉｔｈＲｌｉａｌ?＾ＺＺＩＺ?Ｏ?ｉｍｐｒｏｖｅｄ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ??ｅｐｉｔｈｅＵｕｍ?ｂａｒｒｉｅｒ?ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ?—？?ｔ＞ａｒｒｌｅｒ?ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ??ｋＭ．?■＇，．．＾??？?？?？?Ｏ?ｌｅａｋａｇｅ?ｏｆ?Ｇｌ?？?？?〇?ｒｅｄｕｃｅｄ?ｌｅａｋａｇｅ??＊?？?？?．?？?ｍ？ｔａｔＫｊｌ？ｔｏ＊?？?ｏｆ?Ｇｌ?ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ??４?善??？?ｄｅｔｒｉｍｅｎｔａｌ?ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｎ?ｂｒａｉｎ?ａｎｔｉ?ｂｅｈａｖｉｏｒ?ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ?ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｎ?ｂｒａｉｎ?ａｎｄ?ｂｅｈａｖｉｏｒ??图１－３脆弱拟杆菌通过修复肠黏膜屏障改善ＭＩＡ症状??Ｆｉｇ?１－３?Ｐｒｏｐｏｓｅｄ?Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ－Ｇｕｔ－Ｂｒａｉｎ?Ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ?ｉｎ?ｔｈｅ?ＭＩＡ?Ｍｏｄｅｌ??２．４脆弱拟杆菌利用六型分泌系统限制肠内病原体的定殖，阻止肠道炎症的??发生??肠道菌群是对抗肠道病原体的主要力量，而ＮＥＣ早产儿的肠道菌群多样性??不足

炎症的恢复。综合文献，脆弱拟杆菌荚膜多糖ＰＳＡ可诱导肠道免疫系统的成熟，??通过免疫反应延缓炎症性疾病的过程［６（）］，即诱导肠道Ｆ〇Ｘｐ３＋Ｔｒｅｇ细胞的分化、??ＩＬ－１０的产生及炎症介质的平衡发挥预防和治疗炎症性疾病的作用（图１－４）。??ａ?Ｇｕｔ?Ｂｃａｅｉｏｔｄｅｓ??ｆｒａｇｉｌａ??Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ?ｌｕｍｅｎ??Ｌａｍｉｎａ?ｐｒｏｐｒｉａ??＼?Ｊ?Ｊ?｜?ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ??ＰＳＡ?ＦＯＸＰｉ＇Ｔ＾?ｃｅｌｌｓ??；?ＣＤ４．?ＴＭｌ７ｃｅｌｈ??ＭＨＣ?Ｔｃｅｌｌ??—?遽＾，ＦＮＴ????？?Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ??ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ??Ｔ．ｌｃｅｌｂ??图１－４?ＰＳＡ免疫作用示意图［６１］??Ｆｉｇ?１－４?Ｉｍｍｕｎｅ?ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ?ｂｙ?ｔｈｅ?ｍｉｃｒｏｂｉａｌ?ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ?ＰＳＡ??２．６脆弱拟杆菌能改变巨噬细胞的表型，增加巨噬细胞对致病菌的吞噬能力，??并抑制病原菌在体内定植??Ｄｅｎｇ?Ｈ等体外将分离的脆弱拟杆菌菌体裂解液与骨髓巨噬细胞（ＢＭＤＭ）??共孵育后，在ＭＯＩ为５００的情况下，能明显增加巨噬细胞吞噬荧光微球和致病??性大肠杆菌的能力，对巨噬细胞表型分析，发现脆弱拟杆菌诱导巨噬细胞表达共??刺激分子ＣＤ８０、ＣＤ８６，向Ｍｌ型分化［气此外，ＰａｇｌｉｕｃａＣ等报道脆弱拟杆菌??可抑制汉赛巴尔通体细菌引起的损伤，增加机体的保护功能，减少病原性细菌在??８??

Ｆｉｇ?１－５?Ｔｈｅ?ｂａｃｔｅｒｉａ?ｏｆＺＹ－３１２??３．脆弱拟杆菌抑制坏死性小肠结肠炎的其他可能机制??３．１炎症小体的激活是否参与ＮＥＣ的发生？??ＮＥＣ是肠道免疫功能失衡而引起的炎症性疾病，早在１９９７年，Ｖｉｓｃａｒｄｉ［６６］??，ＮＥＣ上ＩＬ－ｌＣａｓａｓｅ－１，??
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本文编号：2841725