视黄酸缺乏对斑马鱼心脏发育影响的机制研究

发布时间：2021-01-21 22:03

　　第一部分视黄酸缺乏斑马鱼胚胎模型的建立为了深入研究视黄酸缺乏对心脏发育的影响,我们首先探索建立视黄酸缺乏的斑马鱼胚胎模型。视黄醛脱氢酶2（raldh2）是关键的视黄酸合成酶,我们以raldh2为切入点,通过化学遗传学方法和基因knock-down两种途径,抑制raldh2,阻断视黄酸的合成,从而造成斑马鱼胚胎发育过程中视黄酸缺乏,为进一步观察研究视黄酸缺乏对胚胎发育的影响奠定基础。首先,我们选用raldh2抑制剂——对二乙氨基苯甲醛（DEAB）外源性处理斑马鱼胚胎。我们观察到:外源性DEAB处理可以导致斑马鱼胚胎发育异常,且随着DEAB处理浓度升高、处理时点前移,胚胎死亡率和畸形率逐渐上升。在斑马鱼胚胎孵育至原肠胚期,DEAB处理可导致心脏发育异常,表现为心前区水肿、心脏发育呈管状、无向右环化或环化不完全、心房心室大小异常、心搏减弱、血流缓慢等,并出现体节弯曲、头部畸小、胸鳍缺失异常表型。外源性视黄酸能有效援救DEAB的致畸作用,从而证实DEAB处理能有效特异地抑制视黄酸合成,造成斑马鱼胚胎发育过程中视黄酸缺乏。其后,我们利用吗啡啉修饰的反义寡核苷酸（MO）技术在整体水平knock-d... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：96 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

斑马鱼心脏发育模式图【StaiinerDY，2001」

胚胎很快死亡。1一10xlo一6mol/L的DEAB处理胚胎，胚胎也表现出头部、胸鳍、心前区水肿、心脏畸形等，但严重程度较25xl0一 6mol/LDEAB处理组明显减轻，死亡率明显降低(图4)。碑舞几:lpMDEAB5泌笠DEAB图4不同DEAB处理组36hPf胚胎表型 (x90)(侧面观，头向左)A:对照组;B:lxlo一‘mol/LoEAB处理组;e:sx一。一6mol几oEAB处理组;0:10x1o一 6mol/LDEAB处理组。与对照组比较，DEAB处理组胚胎出现心前区水肿、心脏发育异常、卵黄囊增大、头部畸小、尾短弯曲等，而且随着处理浓度升高，畸形程度逐渐加重。22外源性视黄酸对DEAB致畸的拮抗作用为了验证DEAB处理后斑马鱼胚胎发育的异常是通过抑制:aldhZ，造成RA缺乏所致，我们采用了外源性RA，观察其对DEAB致畸作用的影响。我们发现，在胚胎孵育shpf采用 1x10一gmol几的外源性视黄酸(retinoi。acid

(90.9士5.2次/分)、RA处理组(88.6士6.2次/分)、DEAB+RA处理组(89.8士6.5次/分)相比差异有统计学意义(P值<0.05)，而RA处理组、DEAB+RA处理组24hPf胚胎心率与对照组相比差异无统计学意义(P值>0.05)。(图5，6)通过以上实验，我们发现lxlo.gmol/LRA本身并不致畸，却能有效拮抗sxlo·6mol/LDEAB所导致的斑马鱼胚胎发育异常，进而证实外源性DEAB处理能有效地抑制RA的合成，导致斑马鱼胚胎发育过程中RA缺乏。\、甲人么丫乍CO.图5不同处理组的斑马鱼胚胎36hPh时表型比较(x30)A:对照组;B:sxlo一 6mol/LoEAB处理组;e:lxlo一gmol几以处理组;n:sxlo一6mo一/LDEAB+l、10一gmol/LRA处理组。DEAB处理组胚胎表现出体节弯曲、头部畸小、心前区水肿、心脏发育异常、心搏减弱、血流缓慢等表型。RA组和DEAB+RA组胚胎大体表型无明显异常，与对照组比较无差异。


本文编号：2991969