RGC-32在急性肾损伤肾小管修复中的作用及可能机制

发布时间：2017-04-12 07:12

  本文关键词：RGC-32在急性肾损伤肾小管修复中的作用及可能机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：急性肾损伤(Acute Kidney Injury,AKI)为临床常见危重症,指多种原因引起的肾小球滤过率(Glomerular Filtration Rate,GFR)突然下降,临床表现为氮质血症、水电解质和酸碱平衡紊乱以及全身各系统症状。尽管人类对AKI的诊断治疗水平尤其是肾脏替代技术有了长足进步,但AKI死亡率仍高达5%-10%,伴肾外器官衰竭患者可达50%-70%。此外,AKI是引发慢性肾功能不全常见原因之一。急慢性肾损伤已经成为威胁人类健康的重要疾病。因此,积极寻找AKI发生及发展机制,对AKI进行早期诊断及治疗一直是全球肾脏病研究者的热门课题。肾脏急性缺血缺氧再灌注损伤(Acute Ischemia-reperfusion Kidney Injury,AIKI)是临床最常见的AKI病因之一,其主要病理特征为急性肾小管坏死。研究表明,急性肾小管坏死发生后细胞周期循环在肾小管修复过程中起着极其重要的作用。业已证明,补体应答基因-32(Response Gene to Complement 32,RGC-32)为细胞周期关键调控分子,促进细胞周期循环参与细胞增生。本研究第一部分在建立AIKI动物模型基础上,通过实时荧光定量PCR、Western blotting以及免疫组织化学等方法观察了RGC-32在AIKI大鼠肾组织中的动态表达变化及分布,并初步了解其在AIKI大鼠肾组织中的表达规律及其意义。研究发现,大鼠肾缺血再灌注损伤24h后,RGC-32在肾组织表达水平出现明显下调并持续至缺血再灌注后72h,术后1周其表达量逐渐上升至基本正常水平,提示RGC-32可能在急性肾损伤过程中发挥作用。随后,为明确RGC-32在大鼠AIKI过程中的可能机制,本研究第二部分通过体外肾小管上皮细胞损伤模型,利用基因转染技术干预RGC-32表达,进一步观察了RGC-32对肾小管上皮细胞损伤及修复的影响。第一部分:RGC-32在急性肾损伤大鼠肾组织中的表达及意义【目的】:通过建立大鼠AIKI模型,观察RGC-32在AIKI大鼠肾组织中表达变化与分布规律,了解RGC-32在AIKI中的意义。【方法】:采用国际公认的双侧肾蒂夹闭法建立AIKI模型,SD大鼠随机分组:(1)模型组(AIKI组)(n=64):分离大鼠双侧肾蒂,持续阻断45min。并分别于肾脏缺血再灌注后2h、6h、24h、48h、72h、1w、2w、4w分别处死大鼠8只。通过腹主动脉采血检测血清肌酐(Serum Creatinine,Scr)水平。留取肾脏组织,通过实时荧光定量PCR、Western blotting以及免疫组织化学法明确肾组织损伤程度及RGC-32表达变化与分布规律。(2)假手术组(sham组)(n=64):仅分离双侧肾蒂而不进行肾蒂阻断,其余操作同AIKI组。【结果】:(1)通过免疫组织化学方法发现:正常大鼠肾组织中RGC-32主要表达于近端小管、远端小管及集合管上皮细胞,肾小球仅有微弱表达;RGC-32在肾小管间质及肾脏血管无表达。(2)AIKI组缺血再灌注后2h、6h、24h、48h、72h、1w、2w、4w RGC-32蛋白相对表达水平分别为0.0168±0.0029,0.0156±0.0021,0.0065±0.0013,0.0075±0.0013,0.0096±0.0014,0.0132±0.0016,0.0169±0.0014,0.0179±0.0022。其中缺血再灌注后24h、48h、72h两组间RGC-32蛋白表达水平差异具有显著统计学意义(P0.01)。RGC-32 m RNA表达水平变化与免疫组化结果相符。RGC-32蛋白表达与肾小管-间质损伤评分存在显著负相关(r=-0.514,P0.01)。【结论】:(1)首次发现RGC-32蛋白在正常SD大鼠肾组织中主要表达于肾小管上皮细胞胞浆,肾小球系膜细胞可有微弱表达,肾血管及肾小管间质无表达。(2)大鼠肾脏缺血再灌注后,RGC-32于再灌注后24h-72h表达水平明显降低。RGC-32可能在AKI发生发展过程中发挥重要作用。第二部分:RGC-32通过细胞周期参与肾小管上皮细胞损伤及修复过程【目的】:通过体外肾小管损伤模型,研究RGC-32对肾小管上皮细胞周期影响以及参与肾小管上皮细胞损伤修复过程的作用。【方法】:(1)体外培养NRK-52E细胞,TNF-α(10ng/ml)干预制备体外肾小管上皮细胞损伤模型并鉴定。(2)采用瞬时转染技术分别转染RGC-32真核表达载体和RGC-32 si RNA,制备RGC-32高表达组及RGC-32敲低组,验证转染效果。(3)通过流式细胞仪,检测RGC-32高表达组及RGC-32敲低组细胞周期变化。(4)Western blotting方法检测各组细胞损伤标志物及细胞外基质表达。【结果】:(1)与对照组相比,RGC-32敲低组G2/M期比例明显增多(P0.05);RGC-32高表达组S期比例明显增加(与空白质粒对照组比较P0.05)且不影响G2/M期。(2)与对照组相比,RGC-32敲低组细胞损伤标志物NGAL、KIM-1及细胞外基质α-SMA、Fibronectin表达明显增高。【结论】:RGC-32可能通过调控细胞周期G2/M期在肾小管上皮细胞损伤修复过程中发挥重要作用,其确切机制有待进一步阐明。
【关键词】：急性缺血缺氧再灌注损伤 急性肾损伤 补体应答基因-32 肾脏 大鼠 补体应答基因-32 细胞周期 G2/M检测点 肾小管纤维化
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R726.9
【目录】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 英文缩略词表13-15
• 前言15-18
• 第一部分：RGC-32 在急性肾损伤大鼠肾组织中的表达及意义18-44
• 材料与方法18-31
• 结果31-41
• 一、AIKI大鼠肾损伤评价31-38
• 二、RGC-32 在大鼠肾组织表达及分布规律38-40
• 三、RGC-32 表达水平与肾小管-间质损伤程度相关性分析40-41
• 讨论41-43
• 小结43-44
• 第二部分：RGC-32 通过细胞周期参与肾小管上皮细胞损伤及修复过程44-57
• 材料与方法44-50
• 结果50-54
• 一、RGC-32 转染NRK-52E细胞效率50-51
• 二、RGC-32 对NRK-52E细胞周期影响51-52
• 三、RGC-32 对细胞生物学行为的影响52-54
• 讨论54-56
• 小结56-57
• 全文总结57
• 课题创新性57
• 课题局限性57-58
• 参考文献58-62
• 综述 1：儿童急性肾损伤诊断标准及生物标志物研究进展62-72
• 参考文献68-72
• 综述 2：[已发表于《国际儿科学杂志》，2013,40（6）:545-549]利妥昔单抗对儿童难治性肾病综合征的治疗进展72-83
• 参考文献78-83
• 攻读学位期间发表的学术论文目录83-84
• 致谢84

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 廖昌兴;卢晓玲;曾宪凤;;基层医院获得性急性肾损伤的临床特征[J];内科;2007年04期

2 刘天戟;韩冬梅;;125例急性肾损伤诊治体会[J];中国实验诊断学;2007年09期

3 张琳琳;周树生;刘宝;;急性肾损伤早期诊断生物标记物的研究进展[J];中国急救复苏与灾害医学杂志;2008年12期

4 谢潮鑫;孟猛;朱敏敏;蒋兰丽;;急性肾损伤50例临床分析[J];中国中西医结合肾病杂志;2008年12期

5 唐舸;;主动脉夹层动脉瘤并急性肾损伤4例[J];中国血液净化;2009年05期

6 梅长林;;加强急性肾损伤的基础及临床研究,不断提高诊治水平[J];上海医学;2009年03期

7 张益民;;急性肾损伤的远期预后[J];中国中西医结合肾病杂志;2009年07期

8 张小刚;张小丽;;36例急性肾损伤病因及预后分析[J];中国中西医结合肾病杂志;2010年04期

9 戴晖;;47例老年慢性肾脏病合并急性肾损伤相关因素的分析[J];中国中西医结合肾病杂志;2010年06期

10 秦建华;李莹;;脱氧核苷酸钠注射液治疗急性肾损伤的疗效观察[J];西部医学;2010年08期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 王琴;牟姗;严玉澄;顾乐怡;朱铭力;周文彦;施蓓莉;倪兆慧;;院内慢性肾脏病基础上急性肾损伤的调查[A];第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2010年

2 李雪梅;;药物导致的急性肾损伤[A];中华医学会肾脏病学分会2010学术年会专题讲座汇编[C];2010年

3 周奕菁;徐宏;;慢性肾脏病基础上的急性肾损伤的相关因素分析[A];2007年浙沪两地肾脏病学术年会资料汇编[C];2007年

4 刘朋飞;冯业童;董超;刘迪;吴璇;吴昊昱;石毅;周余来;;骨髓间充质干细胞联合维生素E对急性肾损伤的治疗研究[A];第三届泛环渤海（七省二市）生物化学与分子生物学会——2012年学术交流会论文集[C];2012年

5 何飞;张均;卢中秋;高庆龄;沙杜鹃;范国峰;裴力刚;;冠状动脉支架植入术后急性肾损伤的危险因素和预后分析[A];中华医学会急诊医学分会第十六次全国急诊医学学术年会论文集[C];2013年

6 韩国锋;高晶;顾勇;孙晶;张金元;;203例急性肾损伤流行病学分析[A];《中华急诊医学杂志》第八届组稿会暨急诊医学首届青年论坛论文汇编[C];2009年

7 王琴;倪兆慧;牟姗;严玉澄;顾乐怡;戴慧莉;朱铭力;施蓓莉;车妙琳;吴青伟;;尿白介素-18在慢性肾脏病基础上急性肾损伤诊断中的意义[A];第10届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2009年

8 李家瑞;由希雷;;急性肾损伤的营养治疗[A];中华医学会第12次全国内科学术会议论文汇编[C];2009年

9 闫素英;;急性肾损伤[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年

10 陈香美;谢院生;;急性肾损伤的修复再生[A];第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2010年

中国重要报纸全文数据库 前8条

1 记者 谭嘉;急性肾损伤防治应城乡有别[N];健康报;2013年

2 湖南省人民医院 主任医师 梁玉梅 主治医师 陈a音;滥用抗生素引发急性肾损伤[N];大众卫生报;2013年

3 ;药物对体外冲击波碎石术所致老年人急性肾损伤的防护作用[N];中国医药报;2003年

4 记者 唐闻佳;两成急性肾损伤源自乱吃药[N];文汇报;2011年

5 本报记者 朱国旺;急性肾衰要早期诊治规范用药[N];中国医药报;2008年

6 海上飞鱼;透析,并非越多越好[N];医药经济报;2008年

7 本报记者 李颖;警惕慢性肾脏病流行[N];科技日报;2013年

8 本报记者 顾泳;中青年的肾病危机[N];解放日报;2014年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 陈纯波;急性失代偿性心力衰竭引起慢性肾脏病患者的急性肾损伤：尿血管紧张素原的预测作用及预后价值[D];南方医科大学;2014年

2 周蒙;PROGRANULIN在急性肾损伤中的作用及机制研究[D];山东大学;2016年

3 杞少华;骨髓间充质干细胞对顺铂所致大鼠急性肾损伤的保护作用和分子机制[D];武汉大学;2013年

4 蒋春明;抑制糖原合成酶激酶3β诱导巨噬细胞表型转化及其对组织损伤的保护作用[D];南京大学;2016年

5 赵维;盐酸戊乙奎醚预先给药对大鼠横纹肌溶解致急性肾损伤的影响及其相关机制的研究[D];中国人民解放军医学院;2016年

6 孙凯;肝移植术中静脉静脉转流对术后急性肾损伤的保护作用[D];浙江大学;2016年

7 刘远辉;miRNA-20a靶向Atg7影响的自噬对造影剂诱导的急性肾损伤的机制研究及新的急性肾损伤危险因素探讨[D];南方医科大学;2016年

8 李建中;Rictor/mTORC2在急性与慢性肾损伤中作用及机制的研究[D];南京医科大学;2016年

9 关雪晶;Klotho对缺血再灌注急性肾损伤中细胞自噬的作用及其机制研究[D];上海交通大学;2015年

10 王璇;不同药物联合预防泛影葡胺诱导急性肾损伤的机制研究[D];天津医科大学;2016年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 卢海源;Cs菌丝粉对大鼠脓毒性急性肾损伤中klotho蛋白表达的影响[D];河北联合大学;2014年

2 李萌;血清胱抑素C和双源CT肾灌注成像在评估Debakey Ⅰ型主动脉夹层围手术期急性肾损伤中的价值[D];河北医科大学;2015年

3 潘笑悦;不同剂量顺铂诱导小鼠急性肾损伤模型观察及生物学指标检测[D];新乡医学院;2015年

4 国建;急性肾损伤的病因分析及预后危险因素探讨[D];南方医科大学;2015年

5 朱建刚;床旁超声评估严重创伤后急性肾损伤的初步研究[D];浙江大学;2015年

6 徐嘉琪;血尿酸升高和RAS抑制剂的使用：两种非传统危险因素与心血管住院患者急性肾损伤的关系[D];南方医科大学;2015年

7 张仙珍;痛风性关节炎发生急性肾损伤危险因素的临床研究[D];浙江大学;2015年

8 王韦乐;小儿先天性心脏病术后并发急性肾损伤危险因素及腹膜透析应用的探讨[D];南京大学;2014年

9 李U，

本文编号：300966