CUL4B差异蛋白质组学初步研究

发布时间：2021-03-06 04:32

　　2007年,本实验室邹永新等定位了一个X连锁精神发育迟滞致病基因CUL4B,随后对该基因的表达模式及其转录调控、亚细胞定位和在细胞增殖中的作用进行了分析。CULAB属于Cullin基因家族,该家族成员是泛素连接酶E3 （ubiquitin ligase enzymes）的重要组成部分,在蛋白的泛素化过程中发挥重要的功能。由于对CUL4B基因发挥功能的作用机制知之甚少,本研究采用差异蛋白质组学的方法分析该基因表达产物CUL4B引起的蛋白表达谱的变化,进而探索其在相关生物过程中的可能作用机制。蛋白质组学技术由于其高通量、高灵敏度、高精度的特点在生命科学研究领域中受到了越来越多的青睐。在常规技术的基础上,本研究对以二维电泳-质谱（Two-dimensional electrophoresis-Mass Spectrometer,2 DE-MS）联用的蛋白质组学部分流程进行了改进,包括样品的制备,凝胶染色相应的胶内酶解等。在此基础上,通过利用CULAB稳定低表达及过表达HEK293体系,进行CULAB差异蛋白质组学初步研究。第一部分二维电泳-质谱联用蛋白质组学部分流程优化首先,本研究对二维电泳... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

CUL4B稳定低表达HEK293及其对照细胞系2.DE胶图

HEK293和n五 NegHEK293及野生型HEK293间没有显著的蛋白水平在而 CUL4BHEK293和 miNegHEK293及野生型HEK293间有显著差异，如图2一所示。为明确CU以A低表达对Peroxj政xloxln蛋白水平是否也有与CUL4B相同的影响，本研究在野生型HEK293中，通过siRNA介导CUL4A低表达，并没有发现Pero石r改foxin蛋白水平的累积(如图2一3所示)。1汪2.验证CUL4B低表达导致Perox]扮edoxin积累发生在转录后水平为了明确Peroxiredoxin蛋白在CUL4B低表达细胞内的累积是否是由于mRNA转录水平发生了改变，利用 Real.timePCR检测了HEK293稳筛细胞内 PeroxiredoxinmRNA水平的变化。结果显示，在CUL4B低表达的HEK293细胞内，Peroxiredoxinm丑NA水平和对照细胞没有显著差异，表明Perex

构建稳定过表达 cUL4BHEK293(pcDNA3.IA-cuL4BHEK293)及其对照细胞系 (pcDNA3.IAHEK293)。经单克隆培养后，west。毛bfotting验证CU拼B的表达，结果如图2一所示，表明 pcDNA3.IA-cuL4BHEK293相对peDNA3.IAHEK293而言，CUL4B是高表达，即过表达细胞系构建成功。CUL4Bcyc肺nH...阵P.ro劝Per喇redo地nmfe面幼nl，刁改in图2一 westembfotting检测过表达C砚哄 BHEK293体系中Peroxiredoxin和cyclinH蛋白表达水平FigureZ一 DetectiontheperoxiredoxinandCvclinHexpressionontheeffectof stablyovotxPressionofCUMBbyWestemblottlnginHEK293cells.


本文编号：3066442