尿道下裂差异表达miRNA的筛选研究

发布时间：2017-04-15 22:00

  本文关键词：尿道下裂差异表达miRNA的筛选研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的本研究通过筛选尿道下裂包皮组织中差异表达的mi RNA,探讨mi RNA及其靶基因和信号通路在尿道下裂的发病机制中的作用,寻找尿道下裂预防和治疗的新靶点。方法收集9例尿道下裂患儿及3例包茎患儿的包皮组织作为研究对象,其中3例尿道下裂患儿术前接受过HCG治疗。分别在组织中抽提总RNA,对总RNA进行质量检测,利用丹麦Exiqon公司研制的芯片筛选差异性表达的mi RNA,同时采用RT-PCR方法对芯片结果进行验证。进一步结合生物信息学方法对mi RNA的靶基因进行预测,并应用DAVID数据库进行靶基因功能富集分析和信号转导通路富集分析。探讨总结与尿道下裂发病、治疗和预后相关的mi RNA及其调控机制。结果1.mi RNA芯片技术筛选结果:选择差异倍数两倍以上、P值0.05的差异表达mi RNA进行聚类分析。与包茎患儿比较,尿道下裂患儿包皮组织中表达上调的mi RNA共19个,表达下调的mi RNA共15个。对尿道下裂患儿术前是否应用HCG治疗也做了对比分析,术前应用药物较未应用药物患儿包皮组织中表达上调的mi RNA共25个,表达下调的mi RNA共19个。进一步对所有包皮组织差异表达mi RNA进行综合分析发现部分mi RNA形成在尿道下裂组低表达,而在包茎和尿道下裂术前应用药物治疗组高表达。2.RT-PCR验证结果:选择差异表达的10个mi RNA进行RT-PCR验证,其中5个mi RNA得到验证,其差异表达趋势与芯片结果相符,分别为let-7b-3p、mi R-145-5p、mi R-376a-3p、mi R-377-3p、mi R-1-3p。3.生物信息学结果:let-7b-3p、mi R-145-5p、mi R-376a-3p、mi R-377-3p、mi R-1-3p可能与尿道下裂发病相关,靶基因为SOX9、FGF14、FGFR2、TCF7L2、ZEB2、PAX3、SOD1、ZFPM2、THBS1、PAX6、SMAD4、DMRT2等,其功能与胚胎发育、腺体发育、性别分化和伤口愈合等相关,相关信号通路为MAPK信号通路、TGFβ信号通路、Wnt信号通路、钙信号转导通路和前列腺癌相关信号通路等。结论1.首次建立尿道下裂mi RNA基因表达谱,筛选出差异表达的mi RNA,在尿道下裂与包茎、术前是否用药物治疗的尿道下裂间获得差异表达mi RNA,并推测mi RNA表达趋势。2.通过构建特异性茎环RT引物,采用实时定量PCR技术,验证了10个差异表达mi RNA,其中5个mi RNA的RT-PCR结果与基因芯片结果相符。3.预测5个mi RNA的靶基因,并进行靶基因功能分析,总结与尿道下裂相关的mi RNA及其作用机制。
【关键词】：尿道下裂 mi RNA 基因芯片 RT-PCR
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R726.9
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 序言9-11
• 第一部分：尿道下裂差异表达MIRNA的筛选和RT-PCR验证11-32
• 1 材料与方法11-20
• 2 结果20-32
• 第二部分：MIRNA靶基因的生物信息学研究32-39
• 1 对象与方法32-33
• 2 结果33-39
• 讨论39-48
• 结论48-49
• 参考文献49-55
• 综述55-65
• 参考文献61-65
• 英文缩略词一览表65-67
• 攻读学位期间公开发表的论文67-68
• 攻读学位期间承担的科研项目68-69
• 致谢69-70

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本文编号：309320