山西地区苯丙氨酸羟化酶基因突变实验研究

发布时间：2017-04-17 11:11

  本文关键词：山西地区苯丙氨酸羟化酶基因突变实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:85例患儿均来自山西省妇幼保健院新生儿筛查中心和门诊、大同市妇幼保健院、长治市妇幼保健院、运城市妇幼保健院门诊经过各种检查后确诊为苯丙酮尿症的患儿。年龄均在15天至7岁之间,其中48例为男性,37例为女性。初诊时外周血苯丙氨酸浓度测定均在251-2621μmol/L,所有患儿在获得了患儿家长或监护人的知情同意的情况下均进行了血二氢喋啶还原测定、尿喋呤分析和四氢生物喋呤缺乏症负荷试验,将四氢生物喋呤缺乏症排除掉。苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU;OMIM 261600)是可以治愈的少数遗传病之一,在我国的发病率约为1/11572,大部分患者是由于PAH基因突变,导致PAH酶活性降低或消失,使得苯丙氨酸不能转化而在体内大量积蓄,从而导致疾病的发生。目前国内外对苯丙酮尿症的诊断方法耗时长且相当繁琐,且这些方法仅适用于已经出生患儿的诊断,不能应用于产前筛查。因此,通过对山西地区PKU患者中PAH基因的突变位点及特征的研究,探讨PKU基因诊断和产前筛查的方法,并能够进一步丰富中国人PAH基因突变数据库。方法:1、收集山西地区各医院确诊为PKU的患儿标本85例,用PCR体外扩增技术对苯丙酮尿症患者的第3、7和11号外显子进行扩增,进而用相应的内切酶进行酶切突变位点分析;2、采用高分辨熔解曲线分析(High Resolution Melting,HRM)法检测PKU患儿的5、6、7`、11和12号外显子的常见的突变位点。3、对85例PKU患儿PAH基因13个外显子进行体外扩增和测序,然后与正常序列进行比对,统计全部突变信息。结果:1、采用PCR-RFLP,对85例PKU患儿中PAH基因第3、7和11外显子突变进行检测,经测序验证后,两者结果相符;2、本研究中,我们采用HRM法作为筛查工具,对85例PKU患者进行了PAH基因的5、6、7、11和12外显子及外显子-内含子交界区的突变筛查,经测序验证,PCR-HRM产物的检测结果与第5、6、7、11和12外显子PCR产物测序结果完全吻合。3、对85例患者PAH基因13个外显子进行序列分析,其中,L11fs X7、P69H、L98V、T372R和IVS11-1GC五个突变位点在HGMD数据库中尚未报到,并得出R243Q、V399V和Y204C属于山西地区的突变热点;结论:1、PCR-RFLP法具有重复性好、特异性强、准确率高和低成本的特点,为基层开展PAH基因检测提供了简便、快速、准确的方法;2、HRM技术具有高准确度、高通量、低成本的特点,适用于PAH基因的常见突变位点筛查,也可用于新生儿PAH基因的产前诊断;3、通过对山西地区85例PKU患儿PAH基因的13个外显子突变分析,结果显示,患有苯丙氨酸缺乏症的患者中突变频率最高的位点是R243Q,为15.8%,其次为V399V和Y204C。L11fs X7、P69H、L98V、T372R和IVS11-1GC五个突变位点为本研究新发现。为山西地区PKU患儿PAH基因突变提供一定的实验数据,也对我国PKU患者的基因突变资料库奠定一定基础;4、本研究进一步丰富了中国人PAH基因突变数据库。
【关键词】：PKU PAH基因 突变热点 PCR-RFLP HRM
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R440;R725.8
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 常用缩写词中英文对照表11-12
• 前言12-14
• 第一部分 应用PCR-RFLP、HRM法检测经典型苯丙酮尿症患者常见的突变位点..214-24
• 1 材料与方法14-20
• 1.1 研究对象14-15
• 1.2 研究方法15-20
• 2 结果20-23
• 2.1 PCR电泳图20
• 2.2 PCR-RFLP检测结果20
• 2.3 HRM分析结果20-22
• 2.4 DNA 测序结果22-23
• 3 讨论23-24
• 第二部分 山西地区经典型苯丙酮尿症患者基因突变及苯丙酮尿症基因型与表型关系研究24-36
• 1 材料与方法24-27
• 1.1 研究对象24
• 1.2 研究方法24-27
• 2 结果27-34
• 2.1 PCR扩增目的基因结果27
• 2.2 PHA基因部分测序图27-28
• 2.3 PAH基因的突变位点结果28-30
• 2.4 苯丙酮尿症基因型与表型关系30-34
• 3 讨论34-35
• 4 结论35-36
• 参考文献36-38
• 综述38-46
• 参考文献43-46
• 致谢46-47
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果47-48
• 个人简历48

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 张眉，顾学范，张美华，张雅芬，潘星时，黄晓东，沈永年，叶军，，陈瑞冠;中国南方人苯丙氨酸羟化酶基因外显子7点突变及其频率分析[J];中华医学遗传学杂志;1995年06期

2 张志;庄俊汉;黄宗青;许香广;邓英太;彭书新;江剑辉;何蕴韶;;经典型苯丙酮尿症基因全长外显子的突变检测和分析[J];中国优生与遗传杂志;2006年05期

3 毛新梅;何江;刘媛;马晓燕;余伍忠;;宁夏地区回族苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶基因突变分析[J];中华临床医师杂志(电子版);2012年21期

  本文关键词：山西地区苯丙氨酸羟化酶基因突变实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：313084