新生期树鼩感染人乙型肝炎病毒模型的优化

发布时间：2021-06-06 08:32

　　目的:通过探索和比较不同的感染源、接种方式、检测方法和其它辅助措施的感染效果,进一步优化新生期树鼩感染HBV模型。方法:第一部分.优化感染源,制备的多种感染源主要包括:1.乙肝患者单份血清或多份混合血清;2.已证实感染了HBV的树鼩血清;3.分泌HBV颗粒的HepG2.2.15细胞培养液上清;4.含HBV基因组的质粒pT-HBV1.3;5.经过纯化的乙肝患者血清。第二部分.优选接种方式,主要的接种方式包括:1.单纯皮下注射;2.单纯腹腔注射;3.皮下+腹腔注射;4.静脉+腹腔注射;5.经皮直接肝注射;6.剖腹经脾脏肝注射。第三部分.优选适合检测树鼩体内HBV感染标志的方法,主要包括:1.应用FQ-PCR检测血清和肝组织HBV DNA;2.应用ELISA定性检测血清样品的HBV免疫学标志（乙肝两对半）;3.应用TRFIA定量检测血清样品HBsAg;4.应用Dot blot方法检测肝组织的HBV DNA;5.用电子显微镜观察血清和肝组织的HBV颗粒;6.用免疫组化方法检测肝组织的HBsAg和HBcAg;7.用光学显微镜观察肝组织病理变化。第四部分.探索提高感染效率的其它辅助措施,主要包括:... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

1.3HBV质粒图谱

加入 20ml 洗涤缓冲液（Wml 阻断缓冲液（Blocking Bul 抗体液（Antibody Solution，37℃摇床孵育 30min。ml 洗涤缓冲液（Washing Bufl 检测缓冲液（Detection Buf于两层保鲜膜中，赶走气泡7℃曝光 40min~1h，显影。 等方法证实已感染 DHBV 的rn blot 检测结果如图 2。 →1 2 3 4 5

肝组织总 DNA），血清 HBsAg 偶现弱阳性。本组动物的血清未出现 HBsAb。. 经巢氏 PCR (nPCR) 法分析 HBV 基因型（A~F 型），结使用较多的单人血清的 HBV 基因型均为 B 型，所检测的长期感染动物（其中1只为传代感染）的血清，结果同样显。见图 3。M 1 2 3 4 5 6 7

【参考文献】：
期刊论文
[1]树鮈资源的开发利用与标准化研究——我国实验动物资源建设发展战略探讨[J]. 角建林,刘汝文,陈丽玲,李波,何保丽,郑红,沈培清.  中国比较医学杂志. 2009(07)
[2]Interaction of hepatitis C virus envelope glycoprotein E2 with the large extracellular loop of tupaia CD81[J]. Hubert E Blum,Thomas F Baumert.  World Journal of Gastroenterology. 2009(02)
[3]丙型肝炎病毒感染离体培养树鼩肝细胞模型初探[J]. 闵峰,王素美.  肝脏. 2008(03)
[4]地高辛标记探针Southern印迹杂交技术要点及改进[J]. 刘立鸿,许璐,汪凯,张富春,马正海.  生物技术通报. 2008(03)
[5]用人工繁育的围生期和幼年树鼠句感染人乙型肝炎病毒的初步研究[J]. 梁亮,李瑗,杨春,曹骥,苏建家,陈茂伟,班克臣,欧超,段小娴,岳惠芬.  中国人兽共患病学报. 2006(08)
[6]隐匿性乙型肝炎病毒感染[J]. 陈常云,武坚锐,朱新宇,王守义.  中华肝脏病杂志. 2005(11)
[7]丙型肝炎病毒体外可感染树鼩肝细胞[J]. 赵西平,田展飞,陈义春,杨春,田德英,杨东亮,郝连杰.  中华肝脏病杂志. 2005(11)
[8]树鼩实验室繁殖及育幼的探讨[J]. 梁亮,李瑗,杨春,苏建家,段小娴,曹骥,欧超,班克臣,岳惠芬.  四川动物. 2005(02)
[9]不同因素诱发的树齮肝癌组织的基因表达差异[J]. 李瑗,苏建家,曹骥,欧超,仇效坤,杨春,班克臣,岳惠芬,韦薇,欧胜敬,张丽生,万大方,顾健人.  癌症. 2003(10)
[10]树鼩实验感染乙型肝炎病毒的再评价[J]. 王海平,姚志强,周永兴,洪沙,李光玉.  中华肝脏病杂志. 1998(02)



本文编号：3214005