益生菌对轮状病毒感染和腹泻的保护机制

发布时间：2021-06-17 10:33

　　使用益生菌预防或治疗轮状病毒（Rotavirus,RV）感染和腹泻是临床中常用的方案,但具体机制目前还不清楚。在本研究中我们分别在体外RV感染的猪小肠上皮细胞（Porcine small intestinal epithelial cell line,IPEC-J2）模型和体内RV感染的悉生（Gnotobiotic,Gn）猪模型上探索了益生菌对RV感染和腹泻的保护机制。体外研究中,嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus,LA）或者鼠李糖乳酸杆菌（Lactobacillus rhamnosus GG,LGG）在猪轮状病毒（Porcine rotavirus, pRV） OSU或人轮状病毒（Human rotavirus, hRV） Wa接种IPEC-J2细胞前24 h和接种细胞后1 h被用来处理细胞。我们发现pRV在IPEC-J2细胞上的感染力明显高于hRV。LA或LGG处理细胞并不减少RV在细胞上的繁殖和复制。pRV感染细胞增加了MUC3黏蛋白的分泌。LGG可降低pRV感染细胞中分泌型MUC3黏蛋白产量;但可增加正常细胞中膜结合型MUC3黏蛋白产量。病毒感染前2... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：102 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
文献综述
    第一章 轮状病毒、益生菌及其相关研究进展
        1.1 肠上皮细胞在先天性免疫中的作用
            1.1.1 屏障功能
            1.1.2 参与肠黏液层的组成
            1.1.3 产生免疫反应调节剂
            1.1.4 肠上皮细胞的免疫监测功能和TLR
        1.2 RV 及其致病免疫机制
            1.2.1 RV 和RV 感染
            1.2.2 RV 的致病机制
            1.2.3 RV 感染的免疫保护机制
        1.3 益生菌及其对机体免疫作用的影响
            1.3.1 益生菌及其益生作用
            1.3.2 益生菌在预防或治疗肠道炎性疾病的机制
        1.4 RV 感染的Gn 猪模型研究进展
            1.4.1 应用RV 感染的Gn 猪模型对RV 感染发病机理的研究
            1.4.2 应用RV 感染的Gn 猪模型对RV 感染相关免疫问题的研究
            1.4.3 应用RV 感染的Gn 猪模型研究益生菌对RV 感染的免疫调节作用
试验研究
    第二章 以轮状病毒感染的猪小肠上皮细胞为模型研究肠上皮细胞对轮状病毒和益生菌的先天免疫应答反应
        2.1 材料与方法
            2.1.1 猪小肠上皮细胞
            2.1.2 病毒
            2.1.3 益生菌株
            2.1.4 RV 感染和益生菌处理IPEC-J2 细胞的方案
            2.1.5 用TLR 配基和益生菌总DNA 刺激IPEC-J2 细胞
            2.1.6 用免疫荧光法检测RV 感染的细胞
            2.1.7 用CCIF 测定RV 滴度
            2.1.8 用ELISA 测定RV 抗原
            2.1.9 用PAS 染色法检测IPEC-J2 细胞产生的黏蛋白
            2.1.10 用ELISA 检测细胞培养上清中的黏蛋白
            2.1.11 用ELISA 检测细胞培养上清中细胞因子的产量
            2.1.12 用流式细胞技术检测TLR2、TLR3 和TLR9 在细胞上的表达
            2.1.13 数据统计分析
        2.2 结果
            2.2.1 RV 感染IPEC-J2 细胞
            2.2.2 益生菌对RV 在IPEC-J2 细胞上感染力的影响
            2.2.3 IPEC-J2 细胞产生的黏蛋白及益生菌对黏蛋白分泌和表达的的影响
            2.2.4 RV 感染和TLR 配体PGN、PolyI:C 和CpG 刺激IPEC-J2 细胞后的细胞因子反应
            2.2.5 益生菌对RV 感染细胞细胞因子IL-6 和IL-8 反应的影响
            2.2.6 益生菌对IPEC-J2 细胞TLR2、TLR3 和TLR9 表达的影响
            2.2.7 益生菌总DNA 对IPEC-J2 细胞TLR2 和TLR9 表达的影响
        2.3 讨论
        2.4 小结
    第三章 以轮状病毒感染的猪小肠上皮细胞为模型研究轮状病毒和益生菌对肠上皮细胞屏障功能的影响
        3.1 材料与方法
            3.1.1 猪小肠上皮细胞
            3.1.2 病毒
            3.1.3 益生菌株
            3.1.4 测定IPEC-J2 细胞的TEER
            3.1.5 分析IPEC-J2 细胞单层的渗透性
            3.1.6 用Western Blot 确定TJ 蛋白和AJ 蛋白在IPEC-J2 细胞中的表达
            3.1.7 用免疫荧光染色法确定TJ 蛋白和AJ 蛋白在IPEC-J2 细胞上的分布
            3.1.8 数据统计分析
        3.2 结果
            3.2.1 RV 感染和/或益生菌处理对IPEC-J2 细胞单层TEER 的影响
            3.2.2 RV 感染和/或益生菌处理对IPEC-J2 细胞单层通透性的影响
            3.2.3 RV 感染和/或益生菌处理对IPEC-J2 细胞TJ 蛋白和AJ 蛋白的影响
        3.3 讨论
        3.4 小结
    第四章 以轮状病毒感染的悉生猪为模型研究益生菌对轮状病毒腹泻的保护机制
        4.1 材料与方法
            4.1.1 病毒
            4.1.2 益生菌株
            4.1.3 Gn 猪的分组和接种
            4.1.4 样品收集
            4.1.5 检测LGG 的体外排出情况
            4.1.6 用ELISA 和CCIF 检测排出病毒的抗原和病毒滴度
            4.1.7 用ELISA 检测SIC 和LIC 中MUC3 黏蛋白的产量
            4.1.8 体外评价回肠通透性
            4.1.9 用Western Blot 定量TJ 和AJ 蛋白
            4.1.10 用免疫荧光法对回肠上皮组织中的TJ 和AJ 蛋白定位
            4.1.11 用ELISA 检测血清和肠内容物中的细胞因子浓度
            4.1.12 数据统计分析
        4.2 结果
            4.2.1 LGG 的Gn 猪肠道的定植情况
            4.2.2 临诊症状和hRV 感染的情况
            4.2.3 Gn 猪肠道MUC3 黏蛋白
            4.2.4 Gn 猪回肠通透性
            4.2.5 Gn 猪回肠和结肠TJ 和AJ 蛋白
            4.2.6 Gn 猪血清中的细胞因子水平
            4.2.7 Gn 猪SIC 和LIC 的细胞因子水平
        4.3 讨论
        4.4 小结
结论
创新点
参考文献
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]Comparison of the chloride channel activator lubiprostone and the oral laxative Polyethylene Glycol 3350 on mucosal barrier repair in ischemic-injured porcine intestine[J]. Adam J Moeser,Prashant K Nighot,Birgit Roerig,Ryuji Ueno,Anthony T Blikslager.  World Journal of Gastroenterology. 2008(39)
[2]Role of the intestinal barrier in inflammatory bowel disease[J]. Mike G Laukoetter,Porfirio Nava,Asma Nusrat.  World Journal of Gastroenterology. 2008(03)
[3]轮状病毒病毒血症与肠道外脏器损伤的研究[J]. 黄晓磊,陈洁,虞燕萍,陈黎勤,李中跃,赵正言.  浙江大学学报(医学版). 2006(01)
[4]Different cytokine response of primary colonic epithelial cells to commensal bacteria[J]. Sheena Margaret Cruickshank,Joy Carmelina Indira Singh,Mark Farrar,James Peter Alan Lodge,Peter John Felsburg,Simon Richard Carding.  World Journal of Gastroenterology. 2005(22)



本文编号：3235031