早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖与转分化的研究

发布时间：2021-07-15 19:01

　　第一部分高氧对早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖和转分化的影响【目的】建立高氧细胞损伤模型,探讨高氧对早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）增殖和转分化的影响,为高氧肺损伤时肺泡化障碍及肺损伤修复机制的研究提供实验依据。【方法】原代培养早产大鼠（孕19～20 d）AECⅡ,于接种15 h贴壁并更换培养液后,随机分为空气组和高氧组。高氧组通入95% O2-5% CO2 10 min后置于370C、5%CO2培养箱中培养,空气组直接置于370C、5%CO2培养箱中培养。于培养后24、48及72 h,收获各组细胞。高氧对早产大鼠AECII转分化的影响:利用倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞的形态变化;免疫细胞化学染色法检测AECⅡ特异性肺泡表面活性蛋白-C（SP-C）及肺泡Ⅰ型上皮细胞（AECⅠ）特异性蛋白水通道蛋白5（AQP5）的表达;RT-PCR和流式细胞术分别检测SP-C、AQP5 mRNA及蛋白的表达。高氧对早产大鼠AECII增殖的影响:利用血球计数板计数法对培养细胞计数;台盼蓝拒染法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期;免疫荧光法检测Ki67表达。【结果】空气组AECII在培养后其数目不断增... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：90 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

倒置相差显微镜下AECII形态改变(×200)

图 2 透射电镜所见 AEC II（A）及 AECⅠ（B），箭头所示为板层体。、高氧对 AECII 增殖和细胞活力的影响空气组 AECII 在培养 24、48 及 72 h，其细胞数目不断增加。高氧组给氧的细胞数目有少量增加，但随给氧时间延长，细胞增殖明显受抑。高氧组给 72 h，细胞数目明显低于同时间点空气组，两组相比有显著性差异（P<0.蓝排斥试验检测细胞活力可见：直到培养 72 h，空气组(93.5±2.6)%的细胞台染。高氧组给氧最初 24 h，细胞活力尚可，但随高氧暴露时间延长，高氧暴活力明显低于同时间点空气组（P<0.05），高氧暴露 72 h，细胞活力明显0.01）。结果见表 1，图 3A、3B。表 1 高氧对 AECII 增殖和细胞活力的影响(n=5, ± s )组别 细胞数目×105细胞活力（%）0 h 24 h 48 h 72 h 0 h 24 h 48 h 72 h

17图 4 B ki67 表达的免疫荧光检测(×200)A：空气 24 h；B：高氧 24 h；C：空气 48 h；D：高氧 48 h；E：空气 72 h；F：高氧 72 h免疫荧光检测 ki67 表达可见，高氧暴露后 24、48 及 72 h，Ki67+细胞表达较相同时间点空气组均明显降低，且随给氧时间延长，Ki67 表达逐渐降低。

【参考文献】：
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本文编号：3286283