肺炎链球菌氨肽酶N对过敏性哮喘的作用及机制研究

发布时间：2021-07-20 13:08

　　目的:流行病学和实验研究表明,婴幼儿期接触微生物可降低患过敏性哮喘的风险。因而使用具有免疫调节作用的微生物或微生物成分可能成为预防过敏性哮喘的一种新型策略。最近的研究表明肺炎链球菌氨肽酶N（PepN）可以抑制T细胞效应功能。因此,本实验的目的是研究PepN对小鼠过敏性哮喘的作用并初步阐明其作用机制。方法:利用大肠杆菌原核表达技术制备重组蛋白PepN,通过镍柱纯化后进一步去除内毒素。在鸡卵清蛋白（OVA）致敏期间通过滴鼻处理小鼠PepN以研究PepN对过敏性哮喘的影响。通过流式细胞术、趋化因子检测和过继转移评估CD11b⁺树突状细胞（CD11b⁺DCs）在PepN处理的过敏性哮喘小鼠中的作用。此外,使用流式细胞术检测小鼠肺组织2型固有淋巴细胞（ILC2s）的数量。最后,在OVA致敏前处理PepN以进一步确定PepN对小鼠过敏性哮喘的影响。结果:成功制备重组蛋白PepN,经纯化后其纯度高于90%,且其内毒素含量低于0.1EU/μg。在OVA致敏期间处理PepN可以减轻过敏性哮喘小鼠的2型气道炎症（嗜酸性粒细胞增多症、粘液高分泌、Th2细胞因子增加... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

重组蛋白PepN的制备Figure1PreparationofrecombinantproteinPepN

重庆医科大学硕士研究生学位论文18图2致敏期间PepN处理对OVA诱导的过敏性哮喘2型气道炎症的影响Figure2EffcetofadministrationofPepNduringsensitizationontype2airwayinflammationofOVA-inducedallergicasthmaA,Experimentalprotocol.B,TotalinflammatorycellsandeosinophilsinBALF.C,Th2cytokine(IL-5,andIL-13)levelsinBALF.D,PhotomicrographsofH&E-andPAS-stainedlungtissuesectionsofmice(400Xmagnification)andsemi-quantifiedPASscore.E,Muc5acmRNAexpressionlevelinlungtissues.F,IgElevelsinBALFandserum.G,IFN-γandIL-17AlevelsinBALF.H,Th2cytokines(IL-4,IL-5,andIL-13)levelsinspleencellsrestimulatedwith200μg/mlOVAfor72h.

重庆医科大学硕士研究生学位论文20图3致敏期间PepN处理减少了过敏性哮喘小鼠肺部CD11b+DCs数量Figure3AdministrationofPepNduringsensitizationreducednumberofCD11b+DCsinlungsofallergicasthmamiceA,RepresentativeflowdiagramshowingthelungcDCs(CD11c+MHCII+)andcDCssubsetspopulation.B,TotalnumbersoflungcDCsandcDCssubsets.C,Themeanfluorescenceintensity(MFI)ofCD40andCD86expressiononcDCs.D,ThepercentagesofCD40andCD86onCD11b+DCs.3.4在致敏期间处理PepN减少了过敏性哮喘小鼠肺CD11b+DCs相关趋化因子的水平为了进一步探究PepN对肺CD11b+DCs的影响，我们首先测量了过敏原暴露后负责募集DCs至肺的趋化因子的表达。CCL2和CCL8是CCR2的配体，CCR2是在炎症性DCs上表达的趋化因子受体，因而CCL2和CCL8主要募集炎症性DCs至肺部[18,30]。OVA致敏和激发诱导了肺CCL2和CCL8的mRNA表达水平增加，但PepN处理后两者表达水平均保持不变（图4A）。值得注意的是另一种趋化因子CCL20，负责募集未成熟DCs至肺部[17]，其mRNA表达水平在经PepN处理后显著降低（图4A）。与mRNA表达水平的变化保持一致，PepN也降低了过敏性哮喘小鼠BALF和肺匀浆中CCL20的蛋白水平（图4B）。此外，在过敏性哮喘中，负责将效应Th2细胞募集至肺的趋化因子包括CCL17和CCL22，其来源主要为CD11b+DCs[17,20]。因此，我们检测了小鼠肺组织中CCL17和CCL22的mRNA表达，结果显示PepN处理后过敏性哮喘小鼠肺组织中CCL17和CCL22的mRNA


本文编号：3292881