Wnt5a基因在儿童急性白血病的表达及其临床意义

发布时间：2021-08-04 23:01

　　目的：研究Wnt5a基因在儿童急性白血病（acute leukemia, AL）表达情况,比较不同类型AL患儿骨髓单个核细胞Wnt5amRNA表达水平,探讨Wnt5amRNA表达量与AL治疗反应的关系,为临床早期判断白血病的转归,预测复发及为个体化治疗提供新的分子标志和理论依据。方法：以四川省人民医院儿科收治的29例AL患儿的61份初发和缓解期骨髓标本为实验对象。对照组为15例非白血病患儿骨髓标本。使用Catrimox-14TM RNA分离试剂盒提取总RNA,逆转录后用SYBR GreenI实时定量PCR方法检测Wnt5a mRNA的表达,扩增产物的特异性通过熔解曲线和凝胶电泳双重确认,以ABL为内参照,采用2-△Δct法计算其相对表达量。结果1、Wnt5a在AL初治组表达量（0.379±2.867）显著低于非白血病组（22.627±35.134）（P=0.004）；其中在ALL （acute lymphoblastic leukemia,急性淋巴细胞白血病）、AML （acute myeloid leukemia,急性髓系白血病）初治组中表达量为0.467±3.578和0.309±1... 

【文章来源】：西南医科大学四川省

【文章页数】：40 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

总RNA电泳鉴定结果

2、PCR扩增的线性和效率2.1标准曲线建立「5]以标本中正常儿童骨髓RNA的cDNA作为“标准品”，连续10倍稀释建立“标准曲线”。标准曲线的横坐标是人为设定拷贝数的10为底的对数，纵坐标为对应的Ct值。Wntsa基因荧光定量PCR标准曲线的建立以起始拷贝数为(1.0x106)、(1.oxlo7)、(1.oxlos)、(1.0xl护)“标准品”作为模板，分别对应曲线为蓝色、黑色、绿色、红色，于相同反应条件下行荧光定量PCR，得到Wntsa系列稀释标准品的扩增曲线和Ct值(图2一1)。以wntsa系列稀释“标准品”的初始拷贝数为横坐标，Ct值为纵坐标，拟合枷tsa标准曲线。闲8口8口S8L比班旅跳胜旅攘刃护O

L口月L.月阅扭图2一3ABL的荧光强度曲线图2一4ABL的标准曲线 Fig2--3Realti.esePCRst朋d盯 ddyn柳 ieeurveofABLFigZ一 4Realti.eesPCRstandardcurveofABL在模板量4个10倍梯度稀释范围内，Ct值与起始拷贝数间呈线性关系，标准曲线的直线回归相关系数r=0.9993，斜率k=一3.109，截距b=46.2015，直线回归相关系数r=o.9993，回归系数大于0.96，认为拟合满意。 2.2PCR扩增的线性和效率实时荧光Rl’ -PCR对mRNA的定量依赖于PCR扩增的线性和效率。本研究中ABL和Wntsa的标准曲线分别为 :CtABL=一 3.1119cDNA浓度+46.20和Ctwn。。=一 3.0719cD撇浓度十45.61

【参考文献】：
期刊论文
[1]Wnt5a基因在淋巴细胞系恶性肿瘤中的表达分析[J]. 邓刚,司维柯,潘静,赵宸,李招权.  第三军医大学学报. 2008(19)
[2]外源性Wnt5a激活K562细胞非经典Wnt5a/Ca2+信号途径研究[J]. 李招权,司维柯,邹全明,袁媛,潘静,赵宸.  第三军医大学学报. 2008(10)
[3]Wnt5a与髓细胞白血病发生关系的研究[J]. 袁媛,李招权,司维柯,潘静,赵宸.  第三军医大学学报. 2007(21)
[4]外源性Wnt5a诱导K562细胞分化表型的实验研究[J]. 袁媛,司维柯,李招权,潘静,赵宸.  中国实验血液学杂志. 2007(05)
[5]Wnt5a基因在血液病及白血病细胞株中的表达[J]. 李招权,司维柯,潘静,袁媛,邹全明.  中国实验血液学杂志. 2007(05)
[6]一种新颖简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法的建立[J]. 张驰宇,徐顺高,黄新祥.  生物化学与生物物理进展. 2005(09)



本文编号：3322559