基因与蛋白水平抑制B7/CD28信号通路对狼疮样肾炎模型的逆转效应及分子机制研究

发布时间：2021-08-12 21:03

　　B7分子是表达于抗原提呈细胞（antigen-presenting cell，APC）表面的重要协同刺激分子。B7与CD28结合介导的协同刺激作用对初次免疫应答是必需的，若缺乏该信号，T细胞将进入无反应状态（Anergy）或免疫耐受（Tolerance），甚至引起程序性死亡（Apoptosis）。B7/CD28信号通路的过度活化与自身免疫性疾病的发生密切相关。系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种自身免疫性疾病，病因至今尚无明确定论。机体以出现T、B细胞活化增强，产生抗核抗体（antinuclearantibody，ANA）、抗双链DNA（double stranded DNA，dsDNA）抗体、形成免疫复合物（immune complex，IC）以及多种组织器官损伤为其特征。其中狼疮性肾炎（lupus nephritis，LN）是系统性红斑狼疮最常见和最严重的并发症，是导致患者死亡的主要原因。研究表明，B7/CD28信号通路在SLE的发病及病理损伤过程中发挥了重要的作用。RNA干扰（RNA interference，RNAi）是由长约... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

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【学位级别】：博士

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RNA干扰机制Fig.2.MechanismofRNAinterference鉴此，本研究旨在：1、根据小鼠B7-1mRNA序列及RNAi的沉默原则，选择四条靶碱基对，构建小鼠B7-1shRNA慢病毒表达载体，经感染L929细胞后分

图 1- 3 重组慢病毒 LV3-B7-1shRNA 滴度测定Fig.1-3. Titer detection of recombinant lentivirus慢病毒感染 L929 细胞及有效阻断膜型 B7-1 分子的表达照重组慢病毒颗粒按照不同 MOIs 感染 L929 细胞，48 h 后经荧光胞中 GFP 的表达情况以判定感染效率，MOI 为 20、40 和 60 时，为 50.7%、77.6% 和 88.7%，以此确定最优 MOI 值为 60。将重组B7-1 shRNA-256、409、620 及 807 分别感染 L929 细胞，FCM 检测 分子的表达。结果表明，上述重组质粒对L929细胞表面膜型 B7-1 分效率分别为 73.2%、72.4%、61.4%及 55.2%，由此挑选沉默效率最RNA-256 为最佳靶序列，用于后续对狼疮样肾炎模型进行整体干预5）。

18light microscope fluorescence microscope flow cytometry图 1-4 不同 MOI 时重组慢病毒对 L929 细胞的感染效率Fig.1-4. Infection efficiency of recombinant lentiviruson L929 cells at different MOIs

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3339071