体内探讨维生素A对结肠上皮屏障功能的影响

发布时间：2017-05-01 05:13

  本文关键词：体内探讨维生素A对结肠上皮屏障功能的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分 正常维生素A营养水平促进结肠上皮屏障功能目的体内探讨维生素A(VA)对结肠上皮粘膜屏障功能的影响。方法建立孕期开始的VA正常(VAN)、VA缺乏(VAD)大鼠模型,并给予VAD生后1天新生大鼠VA补充(VAS)。利用高效液相色谱仪(HPLC)检测血清中视黄醇水平,Ussing chamber系统检测大鼠结肠上皮粘膜跨上皮电阻(TER)的变化,ELISA试剂盒测定大鼠血清二胺氧化酶(DAO)浓度,Real-time PCR和Western blot技术检测大鼠结肠上皮粘膜组织中RARp、TLR4和ZO-2 mRNA和蛋白的表达水平变化。结果VAD组大鼠血清视黄醇水平显著低于VAN组(P0.001);VAN组大鼠结肠上皮粘膜层的肠上皮电阻明显高于VAD组(P0.001),血清DAO水平较VAD组显著降低(P0.001),提示孕期开始的VA缺乏可能会导致生后仔鼠肠道屏障功能下降。而对VAD生后1天新生鼠给予VA干预后,发现大鼠血清视黄醇浓度较VAD组显著提高(P0.001),与VAN组没有统计学差异。VAS组结肠跨上皮电阻也明显高于VAD组(P0.01),血清DAO水平显著降低(P0.001),但均未达到VAN大鼠正常水平,表明VA补充可有效提高血清视黄醇水平,改善肠道屏障功能。Real-time PCR检测结果显示,VAD组大鼠结肠上皮粘膜层中的RARβ、TLR4和ZO-2的mRNA表达水平均较VAN组显著降低(P0.05,P0.001),而VAS组中上述三种基因的表达水平均较VAD组明显增高,具有统计学差异(P0.001,P0.01). VAN组中的RARβ和TLR4蛋白表达水平均明显高于VAD组,但VAS组的上述两种蛋白表达水平虽较VAD组有上升趋势,却不能完全恢复到VAN组的蛋白水平。结论孕期开始的VA缺乏可导致生后仔鼠结肠屏障功能下降,并与结肠上皮中RARp信号、TLR4和紧密连接蛋白ZO-2密切相关。第二部分孕期开始的VA缺乏降低仔鼠结肠上皮屏障功能目的：探讨LPS感染对孕期开始的VA缺乏(VAD)的仔鼠结肠上皮屏障功能的影响。方法：给予6周龄的VAN和VAD仔鼠脂多糖(LPS)灌胃诱导肠道感染。高效液相色谱仪(HPLC)检测血清中的视黄醇浓度；ELISA试剂盒检测大鼠血清二胺氧化酶(DAO)浓度；采用Real-time PCR和western blot技术,从蛋白和mRNA水平测定RA受体(RARβ)、Toll样受体4和紧密连接蛋白ZO-2的表达变化。结果：1.VAD组仔鼠血清视黄醇水平较VAN组明显降低,LPS感染VAN组后血清视黄醇水平下降明显,但影响血清视黄醇水平的主要因素是VA营养水平(P0.0001)。2.双因素分析发现VA水平与LPS感染均是血清DAO水平的影响因素(P=0.0463和P0.0001),但LPS是引起DAO浓度升高的主要影响因素(P0.0001)。3.VAD大鼠结肠粘膜组织的RARβ、TLR4和ZO-2 mRNA和蛋白表达水平均较VAN组有显著性地降低。LPS感染可明显下调VAN组结肠粘膜层中RARβmRNA表达水平(P0.05),其表达受到VA水平及LPS感染交互作用的影响。而通过双因素分析发现,LPS感染是大鼠结肠粘膜组织中TLR4表达的主要影响因素,VA营养水平是ZO-2表达的关键影响因子。结论：孕期开始的VA缺乏降低TLR4表达水平,减弱仔鼠肠道免疫调节能力；下调ZO-2表达水平,影响结肠上皮紧密连接,使肠道屏障功能减弱,从而影响肠道的抗感染能力。
【关键词】：维生素A 结肠上皮 屏障功能 RARβ toll样受体4 紧密连接蛋白ZO-2 维生素A缺乏 结肠上皮屏障功能 LPS感染 RARβ Toll样受体4 紧密连接蛋白ZO-2
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R725.7
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-14
• 前言14-18
• 参考文献16-18
• 第一部分 正常维生素A营养水平促进结肠上皮屏障功能18-38
• 1. 材料与方法18-27
• 2. 结果27-32
• 3. 讨论32-34
• 4. 小结34-35
• 参考文献35-38
• 第二部分 孕期开始的VA缺乏降低仔鼠结肠上皮屏障功能38-50
• 1. 材料与方法38-39
• 2. 结果39-45
• 3. 讨论45-47
• 4. 小结47-48
• 参考文献48-50
• 全文总结50-51
• 文献综述51-62
• 参考文献56-62
• 致谢62-63
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文及参加的学术交流63

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1 林芳珊;;人体八大屏障功能趣谈[J];健康生活;2007年06期

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本文编号：338309