YAP-TEAD调控CTGF在先天性膈疝模型肺发育不良中的机制研究
发布时间：2021-09-23 20:55
背景:先天性膈疝（congenital diaphragmatic hernia,CDH）是由于胚胎发育异常导致的先天性畸形疾病,是新生儿急危重症之一。探索CDH的发病机制,寻找有效的治疗方法,是临床和科研工作者的重要任务。Hippo信号通路是一条高度保守的抑制性通路,近年来研究发现该通路在肺发育中起着重要作用。目的:本实验通过研究Hippo信号通路的关键效应复合物YAP-TEAD及靶因子CTGF在先天性膈疝胎鼠模型不同胎龄中的情况,分析和探讨膈疝肺发育不良的可能发病机制,对未来阐释致病机理、找到精准治疗方法可能会有一定帮助。方法:15只正常SPF级SD孕大鼠,在胚胎第9.5天（E9.5d）时给予Nitrofen和橄榄油处理,分为CDH组和Control组。分别于E17.5d、E19.5d和E21.5d在麻醉下行剖宫产取出胎鼠,获得胎肺组织,记录胎鼠体重、肺重和致畸情况。HE染色用于观察不同胎龄及不同组别之间肺发育的差异;实时荧光定量PCR用于检测YAP,TEAD（14）和CTGF mRNA表达情况,并分析各指标的相关性;免疫组化染色对YAP、pYAP、TEAD4...
【文章来源】：电子科技大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Hippo信号通路的简要示意图
电子科技大学硕士学位论文14图2-2阴栓法观察托盘内阴栓，红色箭头所指为乳白色胶状阴栓2.2.1.2分组将15只孕鼠在E9.5d时将孕鼠随机分为对照组（Control组）6只和先天性膈疝组（CDH组）9只，分别予以不同处理。Control组：E9.5d时予以橄榄油2ml灌胃。将6只随机平均分为三组（E17.5d、E19.5d、E21.5d），每组2只。CDH组：E9.5d时予以Nitrofen（465mg/kgNitrofen+2ml橄榄油，用水浴锅加热使Nitrofen完全溶解于橄榄油中）灌胃。将9只随机平均分为三组（E17.5d、E19.5d、E21.5d），每组3只。2.2.1.3取肺组织标本孕鼠麻醉及剖腹处理：将CDH组和Control组的孕鼠分别于E17.5d、E19.5d、E21.5d时在戊巴比妥钠（0.05mg/g）麻醉下剖腹取出胎鼠，然后称重，另观察和记录死胎及吸收胎情况。图2-3为孕鼠剖宫产术。胎鼠的解剖及标本采集：在解剖显微镜下，首先固定胎鼠四肢，沿胎鼠胸部正中剖开胸腔，剪开膈肌上方双侧的肋骨，展开双侧胸腔壁可充分暴露双侧胸腔，然后用眼科无齿镊沿气管向下完整取出全部肺组织，立即称重并观察每只胎鼠膈肌缺损位置、大小，嵌入胸腔器官的情况。肺组织标本取出后，一半标本置于4%多聚甲醛溶液中，并于24小时后进行常规蜡块包埋，另一半快速存于液氮罐中然后再转至-80℃冰箱保存。胎鼠肺重统计：计算各组胎鼠的肺指数，即肺重与体重之比（LW/BW×100%），该比值是去除体重不均衡因素后反映肺组织相对发育水平的客观指标。
第二章材料与方法15造模成功标准：CDH组中以观察发现有膈肌缺损的胎鼠视为先天性膈疝胎鼠模型造模成功（无膈肌缺损胎鼠则不计为本次实验标本）。图2-4为膈疝胎鼠示意图。图2-3实施麻醉下无菌剖宫手术图2-4为E19.5d左侧膈疝胎鼠，红色箭头所指为疝入胸腔的肝组织2.2.2肺组织HE染色及形态学观察从Control组和CDH组的三个时期中分别各随机选6个肺组织蜡块，各切一张，共36张切片，厚度约4μm，然后放入自动染色机中，进行常规HE染色。
【参考文献】：
期刊论文
[1]染色体病的分子诊断[J]. 程伟. 检验医学与临床. 2020(03)
[2]基因编辑动物模型在人类疾病研究中的应用[J]. 马宝霞,沈文璐,王旭,李泽,徐坤. 生物工程学报. 2020(05)
[3]Shh信号通路对小鼠胚胎肺发育的调控作用[J]. 包和婧,马树东. 南方医科大学学报. 2018(03)
[4]Hippo信号通路在肺发育、再生和疾病中的功能[J]. 付思玲,赵婉滢,张雯婧,宋海,季红斌,汤楠. 遗传. 2017(07)
[5]产前汉防己甲素干预对膈疝肺血管和结缔组织生长因子的作用[J]. 陈后平,刘文英,唐耘熳,王学军,吉毅,杨纲,徐冰,徐畅,曹李明. 中华小儿外科杂志. 2013 (03)
博士论文
[1]miR-455-5p调控STRA6在Nitrofen诱导的先天性膈疝肺发育不良的机制研究[D]. 郑锦涛.南方医科大学 2017
本文编号：3406394
【文章来源】：电子科技大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Hippo信号通路的简要示意图
电子科技大学硕士学位论文14图2-2阴栓法观察托盘内阴栓，红色箭头所指为乳白色胶状阴栓2.2.1.2分组将15只孕鼠在E9.5d时将孕鼠随机分为对照组（Control组）6只和先天性膈疝组（CDH组）9只，分别予以不同处理。Control组：E9.5d时予以橄榄油2ml灌胃。将6只随机平均分为三组（E17.5d、E19.5d、E21.5d），每组2只。CDH组：E9.5d时予以Nitrofen（465mg/kgNitrofen+2ml橄榄油，用水浴锅加热使Nitrofen完全溶解于橄榄油中）灌胃。将9只随机平均分为三组（E17.5d、E19.5d、E21.5d），每组3只。2.2.1.3取肺组织标本孕鼠麻醉及剖腹处理：将CDH组和Control组的孕鼠分别于E17.5d、E19.5d、E21.5d时在戊巴比妥钠（0.05mg/g）麻醉下剖腹取出胎鼠，然后称重，另观察和记录死胎及吸收胎情况。图2-3为孕鼠剖宫产术。胎鼠的解剖及标本采集：在解剖显微镜下，首先固定胎鼠四肢，沿胎鼠胸部正中剖开胸腔，剪开膈肌上方双侧的肋骨，展开双侧胸腔壁可充分暴露双侧胸腔，然后用眼科无齿镊沿气管向下完整取出全部肺组织，立即称重并观察每只胎鼠膈肌缺损位置、大小，嵌入胸腔器官的情况。肺组织标本取出后，一半标本置于4%多聚甲醛溶液中，并于24小时后进行常规蜡块包埋，另一半快速存于液氮罐中然后再转至-80℃冰箱保存。胎鼠肺重统计：计算各组胎鼠的肺指数，即肺重与体重之比（LW/BW×100%），该比值是去除体重不均衡因素后反映肺组织相对发育水平的客观指标。
第二章材料与方法15造模成功标准：CDH组中以观察发现有膈肌缺损的胎鼠视为先天性膈疝胎鼠模型造模成功（无膈肌缺损胎鼠则不计为本次实验标本）。图2-4为膈疝胎鼠示意图。图2-3实施麻醉下无菌剖宫手术图2-4为E19.5d左侧膈疝胎鼠，红色箭头所指为疝入胸腔的肝组织2.2.2肺组织HE染色及形态学观察从Control组和CDH组的三个时期中分别各随机选6个肺组织蜡块，各切一张，共36张切片，厚度约4μm，然后放入自动染色机中，进行常规HE染色。
【参考文献】：
期刊论文
[1]染色体病的分子诊断[J]. 程伟. 检验医学与临床. 2020(03)
[2]基因编辑动物模型在人类疾病研究中的应用[J]. 马宝霞,沈文璐,王旭,李泽,徐坤. 生物工程学报. 2020(05)
[3]Shh信号通路对小鼠胚胎肺发育的调控作用[J]. 包和婧,马树东. 南方医科大学学报. 2018(03)
[4]Hippo信号通路在肺发育、再生和疾病中的功能[J]. 付思玲,赵婉滢,张雯婧,宋海,季红斌,汤楠. 遗传. 2017(07)
[5]产前汉防己甲素干预对膈疝肺血管和结缔组织生长因子的作用[J]. 陈后平,刘文英,唐耘熳,王学军,吉毅,杨纲,徐冰,徐畅,曹李明. 中华小儿外科杂志. 2013 (03)
博士论文
[1]miR-455-5p调控STRA6在Nitrofen诱导的先天性膈疝肺发育不良的机制研究[D]. 郑锦涛.南方医科大学 2017
本文编号：3406394
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