益生菌对新生大鼠坏死性小肠结肠炎的影响研究

发布时间：2017-05-02 18:04

  本文关键词：益生菌对新生大鼠坏死性小肠结肠炎的影响研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：坏死性小肠结肠炎(NEC)是新生动物和婴儿常见的急性胃肠道疾病,以回肠末端的病变最为严重,发病率和死亡率均很高。本病尽管经过几十年的研究,但其发病机制尚不清楚,确诊困难。为了探究益生菌对坏死性小肠结肠炎的影响,本试验建立了新生大鼠坏死性小肠结肠炎动物模型,并观测了补充益生菌对NEC新生大鼠肠壁中细胞因子IL-6、CXCL1、TNF-α、 PAF和ITF的影响。方法：96只新生Wistar大鼠,随机分成3组：对照组、NEC组和益生菌组。于试验的第4 d,取大鼠回肠末端肠管观察其病理组织学变化；通过实时定量PCR法和ELISA法检测回盲部肠组织中IL-6、CXCL1、TNF-α、PAF口ITF的表达水平。结果：NEC组的病理组织学评分极显著高于对照组(P0.01),益生菌组的病理组织学评分极显著低于NEC组(P0.01)。NEC组的IL-6和CXCL1 mRNA相对表达量极显著高于对照组(P0.01),益生菌组IL-6和CXCL1 mRNA相对表达量极显著低于NEC组(P0.01)并且益生菌组与对照组间IL-6和CXCL1 mRNA相对表达量无差异性(P0.05)；NEC组TNF-α mRNA相对表达量显著高于对照组(P0.05),但益生菌组与NEC组或对照组间mRNA相对表达量无显著差异(P0.05)；在三个试验组间,PAF mRNA相对表达量差异不显著(P0.05)；NEC组和益生菌组ITF mRNA相对表达量极显著低于对照组(P0.01),但益生菌组和NEC组间ITF mRNA相对表达量无差异性(P0.05)。NEC组IL-6、CXCL1和TNF-α的蛋白含量极显著或显著高于对照组(P0.0 1或P0.05),益生菌组IL-6、CXCL1和TNF-α的蛋白含量极显著或显著低于NEC组(P0.01或P0.05)；NEC组和益生菌组PAF的蛋白含量极显著低于对照组(P0.01),但益生菌组和NEC组间PAF的蛋白含量无差异性(P0.05)；在三个试验组间,ITF的蛋白水平差异不显著(P0.05)。结论：益生菌可通过调节肠壁IL-6、CXCL1和TNF-α的基因mRNA和蛋白的表达,降低肠壁的炎症反应,但对ITF和PAF的影响不明显,其作用机理有待于进一步研究。
【关键词】：益生菌 坏死性小肠结肠炎 大鼠 炎性细胞因子 肠三叶因子
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S857.31;R722
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-11
• 符号说明11-12
• 第一部分 文献综述12-24
• 第一章 坏死性小肠结肠炎的研究进展12-19
• 1 NEC的病因12-14
• 1.1 早产12-13
• 1.2 肠道致病菌定植13
• 1.3 喂养不当13-14
• 1.4 肠壁缺血、缺氧和再灌注损伤14
• 2 NEC的致病因子及相关因子14-16
• 2.1 白介素614-15
• 2.2 白介素815
• 2.3 肿瘤坏死因子α15
• 2.4 血小板活化因子15-16
• 2.5 肠三叶因子16
• 3 NEC的诊断16-17
• 3.1 诊断标准16-17
• 3.2 诊断方法17
• 4 NEC的治疗17-19
• 4.1 保守治疗17-18
• 4.2 外科治疗18-19
• 5 NEC的预防19
• 第二章 益生菌对NEC防治作用的研究19-24
• 1 益生菌的菌种19-20
• 2 益生菌的生理学作用及作用机理20-21
• 2.1 对致病菌的竞争排斥作用20
• 2.2 增强肠上皮屏障功能20
• 2.3 产生抗菌类化学物质20-21
• 2.4 调节宿主免疫功能21
• 3 益生菌对NEC的防治作用21-22
• 4 课题研究的意义22-24
• 第二部分 试验研究24-58
• 试验一 新生大鼠坏死性小肠结肠炎模型的建立24-35
• 1 材料24-26
• 1.1 试验动物及分组24
• 1.2 主要仪器24
• 1.3 主要试剂24-25
• 1.4 相关试剂的配制25-26
• 1.4.1 配方乳的配制25
• 1.4.2 脂多糖(LPS)的配制25
• 1.4.3 抗凝管的制备25
• 1.4.4 10%中性福尔马林固定液的制备25
• 1.4.5 2.5%戊二醛固定液的配制25-26
• 1.4.6 梯度酒精的配制26
• 1.4.7 0.5%氨水酒精溶液的配制26
• 1.4.8 0.5%盐酸酒精溶液的配制26
• 1.4.9 伊红染色液的配制26
• 2 方法26-28
• 2.1 新生大鼠坏死性小肠结肠炎模型的建立26-27
• 2.1.1 造模方法26
• 2.1.2 试验分组26-27
• 2.2 样品的采集与固定27
• 2.3 石蜡切片的制作27-28
• 2.3.1 冲洗、脱水和透明27
• 2.3.2 浸蜡、包埋与修蜡27
• 2.3.3 切片、烤片27
• 2.3.4 HE染色27-28
• 2.4 扫描电镜28
• 2.4.1 冲洗28
• 2.4.2 脱水28
• 2.4.3 干燥28
• 2.4.4 粘样28
• 2.4.5 镀金28
• 2.4.6 观察28
• 2.5 数据处理28
• 3 结果28-33
• 3.1 增重29
• 3.2 病理学观察29-30
• 3.3 血液学变化30-31
• 3.4 病理组织学变化31-32
• 3.5 病理学评分32
• 3.6 超微结构变化32-33
• 4 讨论33-35
• 试验二 益生菌对NEC大鼠肠壁病理组织学的影响35-44
• 1 材料35
• 1.1 试验动物及分组35
• 1.2 主要仪器35
• 1.3 主要试剂35
• 1.4 相关试剂的配制35
• 1.4.1 益生菌的配制35
• 1.4.2 其他试剂的配制35
• 2 方法35-36
• 2.1 试验分组36
• 2.2 样品的采集和固定36
• 2.3 石蜡切片的制作36
• 2.4 扫描电镜36
• 2.5 数据处理36
• 3 结果36-42
• 3.1 增重36-37
• 3.2 病理学观察37-38
• 3.3 血液学变化38-39
• 3.4 病理组织学变化39-40
• 3.5 病理学评分40-41
• 3.6 超微结构变化41-42
• 4 讨论42-44
• 试验三 益生菌对NEC大鼠肠壁中ITF和相关细胞因子表达的影响44-58
• 1 材料44-45
• 1.1 试验动物及分组44
• 1.2 主要仪器44
• 1.3 主要试剂44
• 1.4 相关试剂的配制44-45
• 1.4.1 0.1% DEPC水的配制44-45
• 1.4.2 50×TAE的配制45
• 2 方法45-48
• 2.1 样品采集45
• 2.2 荧光实时定量PCR法检测肠壁组织中相关基因的mRNA表达45-47
• 2.2.1 引物设计45-46
• 2.2.2 总RNA提取46
• 2.2.3 RNA浓度和完整性检测46
• 2.2.4 cDNA合成46-47
• 2.2.5 cDNA浓度调整47
• 2.2.6 RT-PCR条件47
• 2.2.7 基因相对表达量的计算47
• 2.3 ELISA法检测肠壁组织中相关因子蛋白的表达量47-48
• 2.3.1 试验材料48
• 2.3.2 方法48
• 2.4 数据处理48
• 3 结果48-55
• 3.1 总RNA提取结果48-49
• 3.2 引物特异性49-50
• 3.3 肠壁组织中IL-6、CXCL1、TNF-α、PAF和ITF基因相对表达量的变化50-53
• 3.3.1 肠壁组织中IL-6 mRNA相对表达量的变化50-51
• 3.3.2 肠壁组织中CXCL1 mRNA相对表达量的变化51
• 3.3.3 肠壁组织中TNF-α mRNA相对表达量的变化51-52
• 3.3.4 肠壁组织中PAF mRNA相对表达量的变化52
• 3.3.5 肠壁组织中ITF mRNA相对表达量的变化52-53
• 3.4 肠壁组织中相关基因蛋白的表达情况53-55
• 3.4.1 肠壁组织中IL-6含量的变化53
• 3.4.2 肠壁组织中CXCL1含量的变化53-54
• 3.4.3 肠壁组织中TNF-α含量的变化54
• 3.4.4 肠壁组织中PAF含量的变化54-55
• 3.4.5 肠壁组织中ITF含量的变化55
• 4 讨论55-58
• 全文总结58-59
• 参考文献59-68
• 致谢68-69
• 攻读学位期间发表的学术论文69-70

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