手足口病常见病原体的实验室诊断方法建立和初步临床应用

发布时间：2021-10-13 22:59

　　手足口病是一种病毒性传染病,由肠道病毒引起的,主要的病原体是肠病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（Cox A16）。婴幼儿及学龄前儿童易感。少部分的手足口病例可并发严重的神经系统疾病,包括脑膜炎、病毒性脑炎、肢体麻痹等,甚至导致死亡。所以该病的早期诊断显得非常重要。本研究拟建立手足口病的病毒核酸和血清抗体检测方法,并对其进行初步的临床评价。目的：建立一种能同时检测肠道病毒、肠道病毒71型和柯萨奇病毒16型等手足口病病原体核酸的实时荧光PCR方法；在原核表达系统中对肠道病毒71型基因进行克隆、表达、纯化,建立血清中IgM抗体的检测方法；并进一步评估人肠道病毒71型IgM抗体在手足口病早期诊断中的价值。主要方法：1、根据肠道病毒、肠道病毒71型和柯萨奇病毒16型等手足口病病原体核酸的基因序列,设计、合成引物和探针,对38例手足口病患者在实时荧光PCR仪上进行扩增、检测和结果分析,并与常规RT-PCR方法的检测结果进行比对。2、采用RT-PCR的方法,分离EV71 VPl基因；将该片段插入表达载体pRSET-A,在大肠杆菌中进行表达,利用纯化后的表达产物,建立检测EV71 IgM抗体... 

【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

部分检测样品的荧光探针一法扩一增曲线

可判定样品为人肠道病毒尼V71/CoxA16病毒阳性。一于石不不不烹不蕊李牛事弃弃=井不不芬共二不二不不图1部分检测样品的荧光探针一法扩一增曲线结果品的RT-PCR检测结果，EV-com、EV71和CoxA16为116bp、226bp、ZO8bp，如图2。

所扩增的EV7IVPI基因与Genbank公布的NM005672，人EV71VPI基因序列同源率为100%。2.4Ev71VPI原核核表达载体的构建及鉴定连接产物的转化菌提取质粒，进行BamHl和Hindlll双酶切，质粒酶切鉴定电泳结果见图4。酶切片段大小与预期一致。3O

【参考文献】：
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本文编号：3435564