Rad1表达下调抑制BPD大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞DNA双链断裂损伤修复及细胞增殖的研究

发布时间：2021-10-26 20:36

　　目的:支气管肺发育不良（BPD）是早产儿常见且严重的呼吸系统并发症,以肺泡发育停滞为主要特征。其病死率高,即使存活也会伴有远期的肺通气、换气及肺泡弥散功能障碍,严重影响患儿的生存质量。但目前尚无有效的治疗手段。Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）作为肺泡上皮细胞的“祖细胞”,当肺上皮受损时,不仅可以自我更新,还能增殖并分化为I型肺泡上皮细胞（AEC I）,在肺泡结构和功能的修复中起着重要的作用。大量研究证实氧化应激是BPD疾病发生发展中的关键环节,但与BPD结局的关系目前尚不明确。DNA损伤是氧化应激的最严重表现形式,其能否修复关乎到细胞的生存及结局,其中DSB双链断裂（DSBs）是DNA损伤最严重的类型,若修复失败则可引发细胞永久性的生长停滞。因此,为了探索BPD肺上皮细胞DNA损伤的病理机制,本研究分别从动物水平、原代细胞水平以及体外细胞高氧暴露试验,应用ELISA、免疫荧光、Western-blot、彗星实验等实验方法,检测BPD大鼠肺组织及AECⅡ中DNA损伤标志物8-ohdG和γ-H2AX的表达变化,以及DNA丝条断裂情况,并在此基础上,利用基因芯片技术,筛选并验证DNA损伤修复信号... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：106 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

肺组织形态学改变（×200）

中国医科大学博士学位论文12图1.4肺组织中γ-H2AX的免疫荧光染色（A）不同日龄（3d,7d,14d）大鼠肺组织中γ-H2AX的免疫荧光染色（×200，红色为荧光标记γ-H2AX，蓝色为DAPI标记细胞核，箭头所示为γ-H2AX阳性细胞）；（B）模型组14d大鼠肺组织γ-H2AX的免疫荧光染色（×800，红色为荧光标记γ-H2AX，蓝色为DAPI标记细胞核，箭头所示γ-H2AX表达于细胞核中）；（C）B组中方框放大后（箭头所示为细胞核内γ-H2AX焦点）3.2.3Western-blot检测肺组织中γ-H2AX的表达水平Western-blot结果显示（图1.5），与对照组相比，模型组的γ-H2AX表达水平从3d开始增加，7d时明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），14d时差异更加显著（P<0.01）。

中国医科大学博士学位论文13图1.5肺组织中γ-H2AX的蛋白表达水平（A）通过Western-blot方法测定γ-H2AX的蛋白表达水平（C：对照组；M模型组）；（B）将γ-H2AX条带的强度标准化为β-actin（*，**与对照组相比，分别P<0.05，P<0.01）3.3肺AECⅡ中DNA损伤标志物的表达3.3.1免疫荧光双染检测肺组织中γ-H2AX与p180共表达免疫荧光双染（图1.6A-C）观察到γ-H2AX表达于细胞核中，p180表达于细胞浆内(图1.6B)。模型组14d大鼠肺组织中可见P180与γ-H2AX共表达，而在对照组，很少有p180和γ-H2AX的共表达(图1.6A)。计数γ-H2AX/P180双染细胞占P180阳性细胞百分比，结果显示(图1.6C)，模型组14d肺组织中γ-H2AX/P180双染细胞占P180阳性细胞百分比显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。

【参考文献】：
期刊论文
[1]高氧诱导慢性肺疾病早产鼠肺组织中氧化及抗氧化系统的动态研究[J]. 富建华,薛辛东.  中华围产医学杂志. 2004(06)
[2]高氧诱导早产鼠慢性肺疾病肺超微结构变化及氧化应激反应的研究[J]. 富建华,薛辛东.  中国当代儿科杂志. 2004(01)
[3]HL-60和SiHA细胞株ATM表达量与60Co照射后细胞周期阻滞之间的关系[J]. 汤屹,刘文励,周剑锋,高庆蕾,吴剑宏.  癌症. 2003(07)



本文编号：3460163