CTLA4Ig及整合素α4β7基因重组腺病毒修饰树突状细胞

发布时间：2021-11-02 05:05

　　第一部分整合素α4、β7基因克隆目的:从小鼠小肠peyer结中克隆小鼠整合素α4、β7基因,为下一步利用腺病毒载体AdEasy system构建Adα4β7打下基础。方法:以小鼠小肠PP提取的总RNA为模板,设计合成扩增小鼠整合素α4、β7基因的特异性引物,进行RT-PCR反应。应用胶回收法纯化目的基因α4、β7,目的基因定向克隆至载体pMD-18, pMD-19,构建质粒pMD-18-α4、pMD-19-β7,进行测序,与已知GenBank中的α4、β7基因进行序列比较,对导致编码氨基酸改变的突变碱基进行定点突变修复。结果:克隆α4、β7基因,序列测定表明α4基因序列有6个碱基突变导致编码氨基酸的改变,β7基因序列有5个碱基突变导致编码氨基酸的改变。利用定点突变技术对造成编码氨基酸的碱基定点突变修复。结论:本研究成功克隆小鼠α4、β7基因,确定对造成编码氨基酸改变的突变碱基定点突变修复。第二部分构建重组腺病毒AdCTLA4Ig、Adα4β7目的:应用腺病毒载体系统AdEasy System构建含有CTLA4Ig、α4β7基因的重组腺病毒AdCTLA4Ig、Adα4β7及其对照腺病毒A... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：139 页

【学位级别】：博士

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重组质粒CTA931-T-3（pFig1-17Themutationrepairingproduct

2.5 突变修复后测序将 CTA996-11 号质粒用 M13-47、RV-M、CTA931 F1、CTA931 R1、C引物进行测序，测序结果正确（图 1-21）。

5. 将 Insert DNA 和 Vector DNA 连接后转化。从转化平板上挑取单菌落进行 PCR扩增电泳示：第 1 泳道扩增出目的基因条带，检测结果表明: CTB082-1 号为阳性克隆（图 1-27）。1 2 3 4 5 M1600bpM1: DNA Marker DL2,0001~5: CTB081-2~5-PCR 产物图 1-27 重组质粒 CTB081 1-5 PCR 鉴定Fig 1-27 Identification of recombinant plasmid CTB081 1-5 by PCR6. 将 CTB082-1 号质粒用引物 pMD18F 进行测序，测序结果正确（图 1-28）。


本文编号：3471395