鸢尾素治疗成骨不全症的机制及动物实验研究
发布时间：2021-11-13 17:53
研究背景和研究目的成骨不全症（Osteogenesis Imperfecta,OI）是以骨脆性增加、胶原代谢紊乱为特征的全身性遗传性结缔组织疾病。绝大多数OI患者是由于编码I型胶原蛋白α1链（Collagen typeⅠα1 chain,Col1α1）和α2链（Collagen typeⅠα2 chain,Col1α2）的基因突变导致的胶原代谢紊乱。根据OI的特征性临床表现分为5个亚型（1-5型）,其临床特征主要包括骨量降低、反复骨折、骨骼畸形、牙本质发育不全、关节松弛、身材矮小。OI症状多于儿童时期开始出现,严重影响患者的生活质量,也给家庭和社会带来沉重的负担。目前,针对OI尚缺乏有效的治愈手段,现行的临床治疗方案主要包括药物治疗、手术矫形、康复锻炼、分子与细胞治疗等。药物治疗为目前主要的治疗方式,其中以双膦酸盐（Bisphosphonates,BPs）的应用最为广泛。BPs是一种骨吸收抑制剂,在体内与骨基质中的羟基磷灰石相结合,通过抑制破骨细胞的活性来改善OI患者的骨骼结构。但BP的用药模式复杂,存在急性期反应（Acute phase response,APR）、非典型股骨骨折（A...
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：96 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
qRT-PCR和蛋白质印迹法检测Irisin促进成骨细胞分化
鸢尾素治疗成骨不全症的机制及动物实验研究-27-图1-2ALP染色和ARS染色检测Irisin促进成骨细胞分化及矿化Oim/oim和wt/wt成骨前体细胞在成骨诱导液中诱导分化，处理组同时加入10ng/ml、100ng/ml的Irisin培养14d（A,C-D）和21d（B,E-F）。14d后进行ALP染色（A），21d后进行ARS染色（B），并用佳能相机（大体）和倒置光学显微镜（局部，40×）拍摄照片。ImageJ软件计算ALP阳性集落形成的面积（Cfu-ALP）（C）和von-Kossa阳性集落形成的面积（Cfu-ARS）（E）。进一步对ALP和ARS活性的定量分析，结果以细胞的蛋白总量作为均一化基数。图A,B的标尺是200μm。Oim/oim:OI基因型;Wt/wt:野生型.*P＜0.05,**P＜0.01vsOim/oim;#P＜0.05,##P＜0.01vsOim/oim＋Irisin10ng/mlgroup,n=3。Figure1-2IrisinpromotingosteoblastdifferentiationandmineralizationinvitromeasuredbyALPandalizarinredSstainingPrimaryosteoblastsofoim/oimandwt/wtwereculturedinosteoblastdifferentiation
鸢尾素治疗成骨不全症的机制及动物实验研究-29-图1-3qRT-PCR和蛋白质印迹法检测Irisin抑制破骨细胞分化Oim/oim和wt/wt的BMMs在破骨诱导液中诱导分化，处理组同时加入10ng/ml、100ng/ml的Irisin培养5d。5d后提取RNA和蛋白，用实时定量PCR检测破骨细胞转录因子（c-fos和NFATc1）和骨吸收相关基因（Calcr、Trap和CTSK）的mRNA表达水平，β-actin作为内参（A-E）。蛋白质印迹技术检测c-fos、NFATc1、Calcr、Trap和CTSK的蛋白表达水平，并将GAPDH作为其标准化的内参（F-G）。Oim/oim:OI基因型;Wt/wt:野生型.*P＜0.05,**P＜0.01vsOim/oim;#P＜0.05,##P＜0.01vsOim/oim＋Irisin10ng/mlgroup,n=3。Figure1-3IrisininhibitingdifferentiationofosteoclastsinvitromeasuredbyqRT-PCRandWesternblotting.BMMsofoim/oimandwt/wtwereinoculatedinosteoclasticculturemediuminthepresenceofIrisin(10ng/mland100ng/ml)for5days.Theexpressionlevelsofosteoclasttranscriptionfactors(c-fosandNFATc1)andresorptionrelatedgenes(Calcr,TrapandCTSK)wereassessedbyqRT-PCRandwerenormalizedtoβ-actin(A-E).Theprotein
【参考文献】：
期刊论文
[1]Exercise-induced irisin in bone and systemic irisin administration reveal new regulatory mechanisms of bone metabolism[J]. Jin Zhang,Paloma Valverde,Xiaofang Zhu,Dana Murray,Yuwei Wu,Liming Yu,Hua Jiang,Michel M Dard,Jin Huang,Zhiwei Xu,Qisheng Tu,Jake Chen. Bone Research. 2017(01)
本文编号：3493449
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：96 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
qRT-PCR和蛋白质印迹法检测Irisin促进成骨细胞分化
鸢尾素治疗成骨不全症的机制及动物实验研究-27-图1-2ALP染色和ARS染色检测Irisin促进成骨细胞分化及矿化Oim/oim和wt/wt成骨前体细胞在成骨诱导液中诱导分化，处理组同时加入10ng/ml、100ng/ml的Irisin培养14d（A,C-D）和21d（B,E-F）。14d后进行ALP染色（A），21d后进行ARS染色（B），并用佳能相机（大体）和倒置光学显微镜（局部，40×）拍摄照片。ImageJ软件计算ALP阳性集落形成的面积（Cfu-ALP）（C）和von-Kossa阳性集落形成的面积（Cfu-ARS）（E）。进一步对ALP和ARS活性的定量分析，结果以细胞的蛋白总量作为均一化基数。图A,B的标尺是200μm。Oim/oim:OI基因型;Wt/wt:野生型.*P＜0.05,**P＜0.01vsOim/oim;#P＜0.05,##P＜0.01vsOim/oim＋Irisin10ng/mlgroup,n=3。Figure1-2IrisinpromotingosteoblastdifferentiationandmineralizationinvitromeasuredbyALPandalizarinredSstainingPrimaryosteoblastsofoim/oimandwt/wtwereculturedinosteoblastdifferentiation
鸢尾素治疗成骨不全症的机制及动物实验研究-29-图1-3qRT-PCR和蛋白质印迹法检测Irisin抑制破骨细胞分化Oim/oim和wt/wt的BMMs在破骨诱导液中诱导分化，处理组同时加入10ng/ml、100ng/ml的Irisin培养5d。5d后提取RNA和蛋白，用实时定量PCR检测破骨细胞转录因子（c-fos和NFATc1）和骨吸收相关基因（Calcr、Trap和CTSK）的mRNA表达水平，β-actin作为内参（A-E）。蛋白质印迹技术检测c-fos、NFATc1、Calcr、Trap和CTSK的蛋白表达水平，并将GAPDH作为其标准化的内参（F-G）。Oim/oim:OI基因型;Wt/wt:野生型.*P＜0.05,**P＜0.01vsOim/oim;#P＜0.05,##P＜0.01vsOim/oim＋Irisin10ng/mlgroup,n=3。Figure1-3IrisininhibitingdifferentiationofosteoclastsinvitromeasuredbyqRT-PCRandWesternblotting.BMMsofoim/oimandwt/wtwereinoculatedinosteoclasticculturemediuminthepresenceofIrisin(10ng/mland100ng/ml)for5days.Theexpressionlevelsofosteoclasttranscriptionfactors(c-fosandNFATc1)andresorptionrelatedgenes(Calcr,TrapandCTSK)wereassessedbyqRT-PCRandwerenormalizedtoβ-actin(A-E).Theprotein
【参考文献】：
期刊论文
[1]Exercise-induced irisin in bone and systemic irisin administration reveal new regulatory mechanisms of bone metabolism[J]. Jin Zhang,Paloma Valverde,Xiaofang Zhu,Dana Murray,Yuwei Wu,Liming Yu,Hua Jiang,Michel M Dard,Jin Huang,Zhiwei Xu,Qisheng Tu,Jake Chen. Bone Research. 2017(01)
本文编号：3493449
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