miR-138通过调节MLK3/JNK/c-jun在慢性缺氧心肌凋亡中的作用研究

发布时间：2021-11-18 08:28

　　研究背景复杂型先心病大部分为紫绀型先心病,是婴幼儿最常见的先天性畸形,主要由心脏任何水平的右向左分流引起的,慢性缺氧是其共同的病理生理过程。长期的临床研究发现,虽然紫绀型先心病患者的心脏被低氧血液长期灌注,但是仍可以抵御心脏外科手术所致的缺血缺氧,且很少发生心力衰竭,提示慢性缺氧可诱导心脏产生代偿性的适应,而这种变化将会对心肌细胞产生保护作用。因此,深入探讨心肌细胞在慢性缺氧条件下的代偿机制,将有助于改进心肌保护策略,提高先心病的临床诊治水平。MicroRNAs （miRNAs）是一种进化上高度保守的短链非编码RNA,可诱导靶基因mRNA降解以及翻译抑制,进而发挥调控蛋白表达的功能。在心肌细胞中,多种miRNAs被报道参与了心肌病理生理过程,并且与慢性缺氧保护密切相关cmiRNA-138（miR-138）是最近研究的较为热门的miRNA之一。在心脏发育中,miR-138起到了关键性调控作用。一旦miR-138表达降低,将会出现不同程度的心室肌形态异常以及心脏功能受损。同时,miR-138还被发现与缺氧相关。缺氧可诱导miR-138表达上调,而这种改变能够促进缺氧细胞的增殖,提示miR-... 

【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市

【文章页数】：116 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－３?ｍｉＲ－１３８在紫巧巧先病患者屯肌中的表达显若高于非紫巧组??２．２．２?ｍｉＲ－１３８慢性缺氧也肌细胞中表达上调??

ｍｉＲ－１３８的表达量明思上升，为ａｇｏｍｉｒ－ＮＣ组的９８倍（＃／？＜０．０５），而ａｎ化ｇｏｍｉｒ组的??ｍ化－１３８表达量则显著下降，而ａｎｔａｇｏｍｉｒ－ＮＣ组的５．９％（＊／７＜０．０５），提示转染效果较??好，沉默及过表达ｍｉＲ－１３８均达到了预期效果（图１－５）。??２．４．２?ｍｉＲ－１３８对细胞调ｔ的影响??（１）将Ｈ９Ｃ２必肌细胞賈于缺氧脾箱中培养７２ｈ，Ｗ建立慢性缺氧必肌模型，而常??氧组细胞则置于普通细胞脾箱内培养同等时间。在缺氧条件下，分别对细胞进行ｍｉＲ－１３８??抑制及过表达处理，设立ａｇｏｍｉｒ组、ａｇｏｍｉｒ－ＮＣ组、ａｎｔａｇｏｍｉｒ组及ａｎｔａｇｏｍｉｒ－ＮＣ组。通??过普通细胞显微镜观察可见，当屯、肌细胞缺氧７化后，出现明显的胞核浓缩，细胞体积??变小、形态异常，甚至出现细胞浓缩、脱落，而在缺氧ａｇｏｍｉｒ组，过表达ｍ化－１％可逆??转Ｗ上也肌损伤进程，使细胞形态恢复正常，抑制ｍｉＲ－１３８后则相反（图１－６）。??■ｒ誦??誦国??国画??图１－６转染ａｇｏｍｉｒ及ａｎ化ｇｏｍｉｒ后，使用、禅通细胞显微镜观察也肌细胞形态，（ａ）常氧组，??（ｂ）缺氧?ｃｏｎｔｒｏｌ?组

当缺氧达到７２小时时，各组之间的差异最大。Ａｇｏｍｉｒ组的细胞数量已达到ａｇｏｍｉｒ－ＮＣ??组的Ｄ６％?（＃／７＜０．０５），而与ａｎｔａｇｏｍｉｒ－ＮＣ组相比，ａｎｔａｇｏｍｉｒ组的细胞数仅为其的０．９??倍（＊ｐ＜０．０５）（图１－７）。上结果提示，ｍｉＲ－１３８的表达上调能够在缺氧条件下显著??促进瓜肌细胞的生长，对其存活具有重要的意义。??＃?＊??，尸??１，５－１??ｃｏｎｔｒｏｌ??ｔ?白?巨?ａｇｏｍｉｒ??含万?１．０．?Ｉ?四?ａｇｏｍｉｒ－ＮＣ??吉号?白ａ?亡３?ａｎｔａｇｏｍｉｒ??長?Ｑ?Ｔ?自?Ｉ?置；６?ｉ?＾?ａｎｔａｇｏｍｉｒ－ＮＣ??＂ｌｉｌｉｉｉａｉｌ??图１－７转染ａｇｏｍｉｒ及ａｎｔａｇｏｍｉｒ后，ＭＴＴ绘制细胞在缺氧Ｏｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２小时时??间点的生长曲线，波长４９０ｎｍ处测不同组的ＯＤ值??（３）?ＬＤＨ即乳酸脱氨酶，几乎在所有类型的细胞中都存在。当细胞调亡或坏死??时，细胞膜的破坏会使胞浆中的ＬＤＦ释放到细胞外，通过检测细胞外液中释放出ＬＤＨ??酶的多少


本文编号：3502563