非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征对Hb E及Hb E/β-地中海贫血的影响
发布时间：2022-01-24 18:58
目的:探讨非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征（Non-deletional hereditary persistence of fetal hemoglobin,nd-HPFH）对血红蛋白E（Hemoglobin E,Hb E）及血红蛋白E复合β-地中海贫血（Hb E/β-地中海贫血）临床特征的影响。方法:病例来源于2016年1月至2017年12月期间在广西医科大学第一附属医院就诊进行地中海贫血筛查及基因检测的病例。对病例进行血常规检测;应用高效液相色谱法（High performance liquid chromatography,HPLC）进行血红蛋白分析;应用跨越断裂点聚合酶链反应（Gap-polymerase chain reation,gap-PCR）进行缺失型α-地中海贫血基因型检测;应用荧光PCR熔解曲线法进行非缺失型α-地中海贫血及β-地中海贫血基因型检测;应用DNA测序法进行γ-珠蛋白基因启动子分析。结果:1.一般资料:共检出76例Hb E杂合子,其中36例复合nd-HPFH;共检出34例Hb E/β-地中海贫血,其中18例复合nd-HPFH。年龄16<...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
本研究所采取的技术路线图
α-地中海贫血是由于α-珠蛋白基因缺陷或缺失导致缺失型α-珠蛋白链合成受部分或完全抑制而产生遗传性溶血性疾病。α-地中海贫血分为缺失型α-地中海贫血与非缺失型α-地中海贫血。缺失型α-地中海贫血主要为α-珠蛋白基因的大片段缺失导致，应用 gap-PCR 技术对病例样本进行缺失型α-地中海贫血基因型检测。gap-PCR 的原理是：在已知的缺失序列两侧序设计出一对互补的引物，在正常人的 DNA 序列中，由于这一对上下游引物之间的 DNA 序列相距较远，扩增的序列很长或扩增序列超出所扩增的有效范围，导致扩增产物不能生成；然而当存在缺失时，原来引物之间相距较大的距离，因为断端连接而使上下游引物靠近，本来扩增不出扩增产物的 PCR反应得以成功扩增出特异的条带，原理示意图见图 2。以人类已知基因组DNA 作为模板，采用单管四重 PCR 技术检测三种最常见的缺失型α-地中海贫血，包括-α3.7、-α4.2、--SEA三种。具体操作步骤如下：
图 3 缺失型α-地中海贫血基因分析结果分别为 2000bp，1800bp，1200bp，800bp； A：正常人（缺失型α-地中海贫血（--SEA）。Figure 3 Results of deletional α-thalassemia gene mutationsm are 2000bp，1800bp，1200bp and 800bp; A: Normal individeletional α-thalassemia(--SEA).
【参考文献】：
期刊论文
[1]珠蛋白基因Gγ-158C>T纯合子突变导致nd-HPFH的研究[J]. 黄欣,陈萍,林伟雄,陈文强,李树全,杨德寨,肖璇,谢湘芝. 广西医科大学学报. 2017(05)
[2]β-地中海贫血CRISPR/Cas9基因治疗研究进展[J]. 李焕荣,李增彦. 国际妇产科学杂志. 2017(02)
[3]珠蛋白基因Aγ-196C→T突变导致nd-HPFH的研究[J]. 李园园,陈萍,肖旋,林伟雄,李树全,丘玉铃,杨得寨,谢湘芝. 广西医科大学学报. 2016(02)
[4]Aγ-225～-222缺失复合β地中海贫血的研究[J]. 朱恒莹,陈萍,林伟雄,李树全,肖璇,谢湘芝,杨德寨. 广西医科大学学报. 2015(02)
[5]非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征的研究[J]. 雷蓓蓓,陈萍,肖璇,林伟雄,李树全,陈文强,谢湘芝,杨德寨,丘玉铃,赖柯彤. 广西医科大学学报. 2013(01)
[6]血红蛋白E的表型与基因型分析[J]. 李友琼,黄惠嫔,覃桂芳,阳文辉,劳忠禅. 中华血液学杂志. 2012 (10)
[7]遗传性持续性胎儿血红蛋白增高症（HPFH）的分子机制[J]. 曾小红,朱宝生. 中国产前诊断杂志(电子版). 2012(02)
[8]异常血红蛋白E复合α-、β-地中海贫血基因型和临床表现的分析[J]. 陈文强,陈萍,李树全,林伟雄,杨德寨. 第三军医大学学报. 2009(15)
[9]血红蛋白E及血红蛋白E复合β地中海贫血的临床分析[J]. 吴教仁,林炳忠,陈钊. 临床血液学杂志. 2004(04)
[10]广西地区6例重症β地贫复合遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征的基因型和临床表现[J]. 蒋南华,梁徐,金琪. 中华血液学杂志. 1995(04)
本文编号：3607122
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
本研究所采取的技术路线图
α-地中海贫血是由于α-珠蛋白基因缺陷或缺失导致缺失型α-珠蛋白链合成受部分或完全抑制而产生遗传性溶血性疾病。α-地中海贫血分为缺失型α-地中海贫血与非缺失型α-地中海贫血。缺失型α-地中海贫血主要为α-珠蛋白基因的大片段缺失导致，应用 gap-PCR 技术对病例样本进行缺失型α-地中海贫血基因型检测。gap-PCR 的原理是：在已知的缺失序列两侧序设计出一对互补的引物，在正常人的 DNA 序列中，由于这一对上下游引物之间的 DNA 序列相距较远，扩增的序列很长或扩增序列超出所扩增的有效范围，导致扩增产物不能生成；然而当存在缺失时，原来引物之间相距较大的距离，因为断端连接而使上下游引物靠近，本来扩增不出扩增产物的 PCR反应得以成功扩增出特异的条带，原理示意图见图 2。以人类已知基因组DNA 作为模板，采用单管四重 PCR 技术检测三种最常见的缺失型α-地中海贫血，包括-α3.7、-α4.2、--SEA三种。具体操作步骤如下：
图 3 缺失型α-地中海贫血基因分析结果分别为 2000bp，1800bp，1200bp，800bp； A：正常人（缺失型α-地中海贫血（--SEA）。Figure 3 Results of deletional α-thalassemia gene mutationsm are 2000bp，1800bp，1200bp and 800bp; A: Normal individeletional α-thalassemia(--SEA).
【参考文献】：
期刊论文
[1]珠蛋白基因Gγ-158C>T纯合子突变导致nd-HPFH的研究[J]. 黄欣,陈萍,林伟雄,陈文强,李树全,杨德寨,肖璇,谢湘芝. 广西医科大学学报. 2017(05)
[2]β-地中海贫血CRISPR/Cas9基因治疗研究进展[J]. 李焕荣,李增彦. 国际妇产科学杂志. 2017(02)
[3]珠蛋白基因Aγ-196C→T突变导致nd-HPFH的研究[J]. 李园园,陈萍,肖旋,林伟雄,李树全,丘玉铃,杨得寨,谢湘芝. 广西医科大学学报. 2016(02)
[4]Aγ-225～-222缺失复合β地中海贫血的研究[J]. 朱恒莹,陈萍,林伟雄,李树全,肖璇,谢湘芝,杨德寨. 广西医科大学学报. 2015(02)
[5]非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征的研究[J]. 雷蓓蓓,陈萍,肖璇,林伟雄,李树全,陈文强,谢湘芝,杨德寨,丘玉铃,赖柯彤. 广西医科大学学报. 2013(01)
[6]血红蛋白E的表型与基因型分析[J]. 李友琼,黄惠嫔,覃桂芳,阳文辉,劳忠禅. 中华血液学杂志. 2012 (10)
[7]遗传性持续性胎儿血红蛋白增高症（HPFH）的分子机制[J]. 曾小红,朱宝生. 中国产前诊断杂志(电子版). 2012(02)
[8]异常血红蛋白E复合α-、β-地中海贫血基因型和临床表现的分析[J]. 陈文强,陈萍,李树全,林伟雄,杨德寨. 第三军医大学学报. 2009(15)
[9]血红蛋白E及血红蛋白E复合β地中海贫血的临床分析[J]. 吴教仁,林炳忠,陈钊. 临床血液学杂志. 2004(04)
[10]广西地区6例重症β地贫复合遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征的基因型和临床表现[J]. 蒋南华,梁徐,金琪. 中华血液学杂志. 1995(04)
本文编号：3607122
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