先天性甲减伴甲状腺肿大患儿DUOX1突变筛查及DUOX1/DUOXA1突变致病机理研究

发布时间：2024-01-31 21:16

　　目的:研究中国山东地区先天性甲状腺功能减退症(Congenital hypothyroidism,CH)伴甲状腺肿大患儿双氧化酶1(DUOX1)基因突变的类型及特点,并对突变CH患儿的临床表型进行确认,建立基因型与表型的关系。对本次研究发现的DUOX1基因突变及前期工作中发现的双氧化酶成熟因子1(DUOXA1)基因突变进行功能学研究,从而阐明DUOX1/DUOXA1基因突变导致CH的致病机理。方法:选取43例甲状腺肿大的CH患儿及100例正常对照新生儿作为研究对象,提取其外周血基因组DNA,采用PCR及一代测序的方法,对DUOX1基因全部外显子进行突变筛查。对本次研究发现的DUOX1基因突变(c.3910G>A,p.R1307Q)及前期工作中发现的DUOXA1基因突变(c.166C>T,p.R56W)进行功能学研究。首先,构建DUOX1、DUOXA1野生型及突变型真核表达载体,提取质粒并转染Hela细胞。利用q-PCR及Western-blot技术从m RNA及蛋白水平上检测DUOX1/DUOXA1基因突变对DUOX1基因m RNA及蛋白表达的影响。其次,利用多功能酶标仪检...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1DUOX1基因PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果

图1DUOX1基因PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果上面条带：从左至右泳道依次为MarkerDL2000，DUOX1基因第1~27外显子扩增产物下面条带：从左至右泳道依次为MarkerDL2000，DUOX1基因第28~35-2外显子扩增引物2DUOX1....

图2DUOX1基因突变位点（c.3910G>A）及SNP位点（c.3228A>G，rs1706804）

图2DUOX1基因突变位点（c.3910G>A）及SNP位点（c.3228A>G，rs1706804）A1:箭头所指为第31外显子c.3910G/G；A2:箭头所指为第31外显子c.3910G/A；A3:箭头所指为第31外显子c.3910C/T....

图3不同物种DUOX1蛋白序列同源性比对图

图2DUOX1基因突变位点（c.3910G>A）及SNP位点（c.3228A>G，rs1706804）A1:箭头所指为第31外显子c.3910G/G；A2:箭头所指为第31外显子c.3910G/A；A3:箭头所指为第31外显子c.3910C/T....

图4PolyPhen2和SIFT对DUOX1蛋白突变位点（p.R1307Q）的预测结果

青岛大学硕士学位论文4SIFT和PolyPhen2预测DUOX1基因突变性质利用SIFT和PolyPhen2在线预测工具对DUOX1蛋白突变位点（p.R1307Q）进行突变性质预测。对于对PolyPhen2来说，score越接近1表示突变对蛋白功....

本文编号：3891564