Six1通过TGFβ1/Smad信号通路调节人支气管上皮细胞16HBE间质转化及纤维化的探究

发布时间：2024-02-04 07:13

　　第一部分Six1过表达对人支气管上皮细胞间质转化及纤维化的影响的研究目的:通过上调Six1在人支气管上皮细胞(16HBE)的表达,研究其过表达对16HBE细胞间质转化和纤维化的影响方法:将含有Six1(NM₀05982)-GV146质粒的甘油菌扩大培养,去内毒素后抽提质粒并测定浓度。体外培养16HBE细胞株并设立实验组、阴性对照组和空白对照组,实验组转染Six1(NM₀05982)-GV146质粒,阴性对照组转染GV146对照空载质粒,空白对照组仅予转染试剂。转染48h后,采用倒置显微镜观察各组细胞形态的变化;采用RT-PCR检测Six1、E钙蛋白、α肌动蛋白、波形蛋白、角蛋白的m RNA的表达;采用Western印迹技术测定Six1蛋白、E钙蛋白、α肌动蛋白、波形蛋白、角蛋白的表达;采用RT-PCR及Western印迹技术检测各组纤维黏连蛋白m RNA及蛋白的表达变化。结果:(1)倒置显微镜下显示:实验组与阴性对照组和空白组相比,细胞从铺路石样向梭形改变,细胞间连接间隙增大;(2)Six1的m RNA及蛋白表达较阴性对照组和空白对照增高,差...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要1
abstract1
摘要2
abstract2
第一部分 Six1过表达对人支气管上皮细胞间质转化及纤维化的影响的研究
    引言
    第1章 实验材料
        1.1 主要试剂及来源
        1.2 主要器械及来源
        1.3 主要溶液配制
    第2章 实验方法
        2.1 质粒扩增及抽提
        2.2 16HBE细胞的传代与培养
        2.3 细胞铺板及转染
        2.4 RT-PCR检测各组细胞中Six1及EMT和纤维化相关m RNA表达
        2.5 Western bolt检测各组细胞中Six1、EMT相关蛋白及纤维黏连蛋白的表达水平
        2.6 统计学方法
    第3章 实验结果
        3.1 各组16HBE细胞中Six1 的表达
        3.2 上调Six1对16HBE细胞形态的影响
        3.3 上调Six1对16HBE细胞表型标志物m RNA及蛋白表达水平的影响
        3.4 上调Six1对16HBE细胞中纤维黏连蛋白表达的影响
    第4章 讨论
    第5章 结论
    参考文献
第二部分 Six1通过TGFβ1/Smad信号通路调节人支气管上皮细胞间质转化及纤维化的研究
    引言
    第1章 实验材料
        1.1 主要试剂及来源
        1.2 主要器械及来源
        1.3 主要溶液配制
    第2章 实验方法
        2.1 质粒扩增及抽提
        2.2 16HBE细胞的传代与培养
        2.3 细胞铺板及转染
        2.4 TGFβ1信号通路的抑制
        2.5 Western bolt检测各组细胞中EMT、TGFβ1/Smad信号通路相关蛋白及纤维黏连蛋白的表达水平
        2.6 统计学方法
    第3章 实验结果
        3.1 上调Six1对16HBE细胞中TGFβ1/Smad信号通路的影响
        3.2 抑制TGFβ1 信号通路对Six1-16HBE细胞形态的影响
        3.3 TGFβ1 通路抑制剂对Six1-16HBE细胞中TGFβ1、phospho-Smad2 蛋白表达水平的影响。
        3.4 TGFβ1 通路抑制剂对Six1-16HBE细胞中E钙蛋白和α肌动蛋白表达水平的影响。
        3.5 抑制TGFβ1/Smad信号通路对Six1-16HBE细胞中纤维黏连蛋白表达水平的影响。
    第4章 讨论
    第5章 结论
    参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间研究成果
缩略词表
致谢



本文编号：3895428