16SrRNA荧光定量PCR技术检测轮状病毒肠炎患儿肠道菌群的变化

发布时间：2024-07-07 01:52

　　目的：研究轮状病毒肠炎患儿肠道菌群的变化并和同年龄同性别的健康儿童进行比较。从微生态的角度分析轮状病毒肠炎的发生与肠道菌群变化的相互关系。为微生态制剂用于轮状病毒肠炎患儿的预防和治疗提供依据。并探讨荧光定量PCR技术在该领域应用的实用性和可行性，以便推广应用。 方法：收集轮状病毒肠炎患儿及健康对照组儿童的粪便标本提取目标细菌DNA。应用细菌的16SrRNA序列设计双歧杆菌、大肠杆菌及乳酸杆菌的引物，行常规PCR完成细菌的定性，然后取准确定量的三种细菌DNA经系列稀释后做荧光定量PCR，制作出标准曲线，待测样品同时进行荧光定量PCR反应并和标准曲线进行比较，获得各样品中三种细菌的量。 结果：轮状病毒肠炎患儿的肠道菌群与健康儿童比较发生了明显的变化，其肠道中双歧杆菌和乳酸杆菌的数量差异有统计学意义(P＜0.05)，而大肠杆菌的数量无显著性变化(P＞0.05)。用本方法所得结果与其他文献报道的用传统的细菌培养方法所得结果相近。 结论：轮状病毒肠炎患儿肠道中益生菌的数量较正常对照组明显减少。在轮状病毒肠炎的治疗过程中，应避免或清除可能加重肠道菌群紊乱的因素，采用微生态制...

【文章页数】：38 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1电泳结果

95℃15s,55℃1min,72℃45s共30个循环,最后以72℃10min延伸后结束。扩增产物通过PAGE电泳显示各细菌的扩增片段。如图1所示。　　左1~3道为乳酸杆菌,4~6道为双岐杆菌,7~9道为大肠杆菌,10道为标准分子量Mark图1　电泳结果1.2.4　....

图2双岐杆菌的标准曲线

标准样品通过PCR产物进行纯化获得。将三种细菌的标准样品按上述条件进行荧光定量PCR反应作为标准曲线,见图2(所示为双歧杆菌标准曲线),以不同拷贝数的阳性模板的对数为横坐标,以PCR反应过程中出现荧光信号的初始循环数(Ct)为纵坐标绘制而成。待测样品同时进行荧光定量PCR并和标准....

图1电泳结果，其中左1一3道为乳酸杆菌，4一6道为双歧杆菌，7一9道为大肠杆菌，10道为标准分子量Mark

在80V的电压下电泳90分钟使蓝色指示带走到胶孔中间偏下的位置，取下电泳胶，放入显色液N(aH07.59，甲醛5.4ml，加蒸馏水至500m)l中显色30分钟后将电泳胶放置在凝胶成像仪中照相，即可显示各细菌的扩增片段，图1所示。3.4荧光定量PCR反应:同样的方法配制混合液，反应....

图210份标本所得双歧杆菌的溶解曲线，显示产物的TM值为88℃一91℃

M盯k02〕bb图1电泳结果，其中左1一3道为乳酸杆菌，4一6道为双歧杆菌，7一9道为大肠杆菌10道为标准分子量Mark

本文编号：4002971