先天性肾上腺皮质增生症CYP21A2基因诊断研究

发布时间：2025-02-05 14:01

　　目的：应用PCR限制性酶切法和DNA序列分析法对先天性肾上腺皮质增生症患者和携带者进行遗传学检测,探讨其方法的优劣性和可靠性,为临床、产前诊断及遗传咨询提供可靠依据。 方法：收集7个家系的先天性肾上腺皮质增生症患者及其家属血样,提取血液DNA。用特定引物特异性扩增21羟化酶(CYP21A2)基因,用限制性内切酶法鉴定常见致病突变工172N、i2g、Del、P30L、Q318X、V281L、E6Cluster、R356W、Exon3 Del8 bp。不能确诊的病例进一步用PCR测序分析方法检测所有外显子及其侧翼序列。 结果：应用PCR限制性酶切法对先天性肾上腺皮质增生症家系的患者和携带者CYP21A2基因检测,诊断常见的突变为i2g、Q318X、Del、Exon3 Del8bp、R356W等。有部分等位基因未完全确切检测出突变,进一步应用PCR测序分析法检测发现i2g、I172N等突变。一例失盐型患儿发现Q318X突变合并有CD387 AAC→AAA改变。 结论：测序分析法是对PCR限制性内切酶法检测先天性肾上腺皮质增生症的一个有益补充,对于常见的突变i2g、工17...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2.2一2:正常对照，2和3:129纯合突变

电泳呈156bp片段，如有论g突变，被切成133和23bp长度。在电泳时杂合突变表现为156bp下多一条133bp带，但并不能以此判断129纯合与杂合突变。因为存在偏性扩增，酶切不完全等问题。如图2.2一1和2.2一2。图2.2一1:正常对照;2和3:129杂合突变图2.2一....

图2.3.1一2CYP21^2基因片段DPCR扩增结果1%TAE琼脂糖图

为引物扩增CYPZIA2基因片段C，1%琼脂糖凝胶电泳，澳化乙锭染色，紫外光照相结果显示大小符合的特异性目的条带。(见下图)。图2.3.1一IC丫P21A2基因片段CPCR扩增结果1%TAE琼脂糖图图2.3.1一2CYP21^2基因片段DPCR扩增结果1%TAE琼脂糖图

图2.3.1一IC丫P21A2基因片段CPCR扩增结果1%TAE琼脂糖图

相结果显示大小符合的特异性目的条带。(见下图)。图2.3.1一IC丫P21A2基因片段CPCR扩增结果1%TAE琼脂糖图图2.3.1一2CYP21^2基因片段DPCR扩增结果1%TAE琼脂糖图

图2.4.2一1人类基因突变数据库(HGMD)1172N突变

硕士学位论文结果2.4.2.172N突变测序结果:1172N突变也是常见的突变。测序分析方法比ACRS方法准确。如图2.4.2一2所示，测序发现ATC和AAC杂合突变显示的套峰。Adren81CM880020ATCeeAACIle一Asn172NatlAeadSe....

本文编号：4029947