Tie2信号系统激活对血管内皮细胞的保护作用

发布时间：2017-05-31 00:04

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【摘要】：研究背景:微血管内皮损伤是急性肾损伤和慢性肾脏疾病共同的病理改变,贯穿于它们的发生、发展过程。与肾小管上皮细胞相比,肾微血管内皮细胞缺乏有效的再生能力,当肾功能恢复到正常水平以后,肾周微血管密度的降低或丢失的病变仍将长期存在,最终将导致慢性肾小管间质纤维化。Tie2信号系统被认为在血管内皮的保护方面起着重要的作用,研究中该信号系统的激活多应用Ang-1,但也有研究显示Ang-1促进急性肾损伤,炎症细胞浸润,后期促进肾纤维化。因而我们集中研究Tie2信号对血管内皮的保护作用。目的:本研究建立脂多糖诱导的血管内皮细胞损伤,探讨Tie2信号系统激活对血管内皮细胞是否具有保护作用。为后期进一步研究提供依据。方法:第一部分离体培养人脐静脉血管内皮细胞HUVEC,以4×104接种于96孔板,200ul/孔。分别以浓度0ug/ml,0.125 ug/ml,0.25 ug/ml,0.5 ug/ml,1 ug/ml,2 ug/ml,5 ug/ml,10 ug/ml的LPS刺激损伤细胞。孵育24小时,采用cck8法测定细胞活性。根据结果选择适宜的LPS浓度,建立细胞损伤模型。第二部分根据第一部分结果选择LPS刺激浓度为10 ug/ml。细胞分为三组:正常对照组;LPS组;LPS+Tie2单抗组。应用Elisa技术检测孵育24小时后各组细胞上清s VCAM-1的表达水平。应用PCR技术检测孵育6h后各组细胞VCAM-1 m RNA的水平变化。应用PCR技术检测孵育6h后各组细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2的水平变化。应用WESTERN BLOT技术检测孵育24、48小时后,各组细胞α-SMA的表达水平的变化。结果:第一部分cck8结果显示,内皮细胞被不同浓度LPS损伤刺激后,各浓度LPS均对细胞增殖活性产生抑制作用,与正常细胞比较差异有统计学意义(P0.05)。第二部分采用10 ug/ml LPS刺激损伤细胞后,LPS组细胞上清s VCAM-1分泌量与VCAM-1 m RNA较空白对照组明显升高(P0.05)。加入Tie2激发单抗后水平下降(P0.05)。孵育6h后,LPS组细胞Baxm RNA与Baxm RNA/Bcl-2m RNA较空白对照组明显升高(P0.05)。加入Tie2激发单抗后水平下降(P0.05)。各组Bcl-2基因水平无明显差异(P0.05)。孵育24h及48h后,LPS组细胞α-SMA水平较空白对照组明显升高(P0.05)。加入Tie2激发单抗后水平下降(P0.05)。结论:1.LPS可引起血管内皮细胞不同程度损伤,Bax基因表达增加提示细胞凋亡增加,VCAM-1表达增加提示细胞发生炎症反应,α-SMA水平升高,提示细胞发生了转分化。2.加入Tie2激发单抗后,细胞VCAM-1蛋白与基因水平低表达、Bax/Bcl-2下降说明Tie2信号系统激活对血管内皮细胞具有抗炎、抗凋亡的作用。3.加入Tie2激发单抗后,细胞α-SMA表达水平下降,说明Tie2激发单抗可以抑制细胞向肌成纤维细胞方向转分化。
【关键词】：Tie2信号 微血管内皮细胞损伤 炎症反应 凋亡 Endo-MT
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R726.9
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 研究背景9-13
• 参考文献11-13
• 材料和方法13-20
• 实验结果20-28
• 讨论28-32
• 结论32-33
• 不足与展望33-34
• 参考文献34-37
• 综述37-46
• 参考文献42-46
• 中英文对照缩略词46-47
• 攻读学位期间公开发表的论文47-48
• 本课题资助项目48-49
• 致谢49-50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

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本文编号：408190