NgR特性siRNA对宫内感染所致早产鼠脑损伤修复作用

发布时间：2017-06-08 01:06

  本文关键词：NgR特性siRNA对宫内感染所致早产鼠脑损伤修复作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨Ng R特异性si RNA沉默Nogo-66受体(Ng R)表达对宫内感染所致脑损伤早产鼠行为学和病理学影响,初步阐明Ng R-Rho A信号通路在宫内感染所致早产鼠脑损伤后修复中的可能作用机制。方法:随机选取40只孕18天的SD大鼠,其中35只孕鼠是腹腔注入LPS0.25mg/(kg·次),每天1次,连用2天,获得脑损伤早产鼠,随机选取212只,雌雄不限,然后再随机分为脑损伤组(62只)、阴性对照组(50只)和干扰组(50只),另外50只用于侧脑室定位;对剩余5只孕鼠腹腔皮下注射等量的RU4860.15mg/(kg·次),每天1次,连用2天,诱导早产,随机选取62只,雌雄不限,为早产鼠组。早产组和脑损伤组早产鼠不做任何干预;干扰组和阴性对照组,分别于出生后第1天(P1)侧脑室1次性注入Ng R特异性si RNA和慢病毒空载体,剂量均为250ul/kg。根据实验设计分别在P1(不包括干扰组和阴性对照组)、P3、P10、P14随机选取新生鼠6只进行心脏灌注取脑,分别制备脑组织冰冻切片和匀浆。HE染色观察脑组织病理学变化、CD11b免疫荧光观察小胶质细胞活化,O4+免疫荧光观察观察OPCs分化,QRT-PCR检查Ng R m RNA的表达,Western-blot测定活性Rho A蛋白。各组剩余20只的早产鼠在P30应用动物行为学软件行行为学检测。结果:1.Ng R m RNA:脑损伤组Ng R m RNA相对表达量在P1、P3均分别高于早产鼠组,均有统计学意义(P0.05),至P10两组间无统计学意义(P0.05);干扰组的Ng R m RNA的相对表达量在P3均低于脑损伤组、阴性对照组,有统计学意义(P0.05),P10、P14与早产鼠组、脑损伤组、阴性对照组比较均无统计学意义(P0.05)。2.Rho A蛋白:脑损伤组Rho A蛋白灰度值在P3明显高于早产鼠组(P=0.00),并且有统计学意义(P0.05),至P10两组间无统计学意义(P0.05),干扰组Rho A蛋白灰度值在P3、P10明显低于脑损伤组、阴性对照组,早产鼠组,有统计学意义(P0.05),至P14与脑损伤组、阴性对照组、早产鼠组,无统计学意义(P0.05)。Ng Rm RNA相对表达量与Rho A蛋白的变化在P3、P10、P14呈正相关性(r=0.92,0.86,0.90)。3.HE染色:P10、P14天早产鼠组脑白质区域组织无明显稀疏,OPCs细胞数量较多;P10、P14脑损伤组在脑白质区域组织稀疏,OPCs细胞数量明显较少。4.CD11b免疫荧光:脑损伤组CD11b平均荧光强度在P1、P3、P10均分别高于早产鼠组,均有统计学意义(P0.05),至P14两组间无统计学意义(P0.05);干扰组的CD11b平均荧光强度在P3、P10均低于脑损伤组、阴性对照组,有统计学意义(P0.05),P14与早产鼠组、脑损伤组、阴性对照组比较均无统计学意义(P0.05)。5.O4+免疫荧光:O4抗体标记的细胞中,在3天脑损伤组和阴性对照组中细胞形态为三极形态;P10、P14脑损伤组与阴性对照组除了有三极细胞的形态外,还出现了部分细胞形态不一,并且呈散在分布。而在P3的早产鼠组和干扰组细胞除了有三极形态外,还有部分细胞呈现网状分布;P10、P14的细胞出现三极形态、网状分布外,还有部分细胞呈片状分布。6.行为学检测:悬吊实验、拒俘实验、旷场实验、斜坡实验中,脑损伤组评分在P30均高于早产鼠组,均有统计学意义(P0.05),干扰组评分在脑损伤组、阴性对照组比较均无统计学意义(P0.05)。结论:1.在经LPS诱导的宫内感染所致的早产鼠脑损伤中,Ng R-Rho A信号通路可能是脑损伤发生的重要机制之一。2.Ng R-Rho A信号通路在宫内感染所致早产鼠脑损伤中的作用,可能通过该信号通路的持续激活,导致小胶质细胞过度活化损伤OPCs,同时抑制OPCs的分化。3.侧脑室注射Ng R特异性si RNA能显著改善宫内感染所致的脑损伤早产鼠的行为学评分。表明干扰Ng R基因的表达,抑制Ng R-Rho A信号通路激活在早产鼠脑损伤后的修复中具有脑保护作用。
【关键词】：NgR特异性siRNA 宫内感染 脂多糖
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R722.6
【目录】：

• 摘要8-11
• ABSTRACT11-14
• 前言14-17
• 研究材料与方法17-27
• 实验材料17-19
• 实验方法19-27
• 1 实验模型的建立19-20
• 1.1 实验动物19
• 1.2 早产鼠组和脑损伤组模型19
• 1.3 侧脑室注射定位19-20
• 2 侧脑室注射NgR si RNA的滴度和量20
• 3 QRT-PCR 实验20-22
• 4 Western-blot22-24
• 5 心脏灌注取脑24-25
• 6 冰冻切片25
• 7 HE染色25
• 8 免疫荧光25-26
• 9 行为学检测26-27
• 统计学分析27-28
• 实验结果28-36
• 实验讨论36-42
• 结论42-43
• 参考文献43-52
• 综述52-69
• 参考文献63-69
• 作者简介及读研期间主要科研成果69-70
• 致谢70

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 于威威;白细胞介素-6与宫内感染[J];牡丹江医学院学报;2001年04期

2 顾佩宝;宫内感染的监测和防治[J];现代实用医学;2001年04期

3 顾扬,贾青青;乙型肝炎免疫球蛋白阻断HBV宫内感染的临床研究[J];江苏临床医学杂志;2001年03期

4 朱利华,骆纯才;人类微小病毒B_(19)宫内感染的研究进展[J];现代实用医学;2002年08期

5 叶庆华;乙肝病毒宫内感染的研究[J];国外医学.妇产科学分册;2002年01期

6 董兆文;宫内感染的分子生物学研究[J];国外医学(计划生育分册);2002年01期

7 张平,朱理珉,张玉荣,李伟,陈静,郝金玉;孕期乙肝病毒宫内感染的临床观察[J];天津医药;2004年04期

8 汤光凤,邓爽;孕期干预减少宫内感染所致出生缺陷2660例临床观察[J];中国优生与遗传杂志;2004年04期

9 姜

本文编号：430850