CD133-2在儿童B系急性淋巴细胞性白血病发病中的作用及其机制初步研究

发布时间：2017-07-07 16:26

  本文关键词：CD133-2在儿童B系急性淋巴细胞性白血病发病中的作用及其机制初步研究

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【摘要】：目的：探究CD133-2在儿童B系急性淋巴细胞白血病（B-ALL）发病中的表达规律、CD133-2+白血病细胞的生物学特性和调控该群细胞的信号通路相关分子，为鉴定CD133-2是否为儿童B-ALL白血病干细胞（LSC）的一项标志和阐明其调控的分子机制奠定实验基础。 方法： 1、流式细胞术检测42例初诊和复发的B-ALL患儿及10例对照组儿童的骨髓（BM）单个核细胞（MNCs）的CD133-1、CD133-2表达，并观察其与临床预后指标的相关性。 2、选取6例CD133-2阳性表达(表达比例≥20%)的B-ALL患儿的新鲜骨髓标本，用磁珠分选（MACS）分离纯化出CD133-2+CD19+、CD133-2+CD19-、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-四组亚群细胞，进行体外含血清悬浮培养，观察其增殖能力，RT-PCR检测融合基因的表达。对其中3例磁珠分选的四组亚群细胞行甲基纤维素半固体培养，观察其集落形成能力。 3、采用实时定量PCR技术对3例B-ALL患儿的CD133-2+CD19-、CD133-2+CD19+、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-细胞亚群分别进行干细胞相关信号通路的基因表达筛查，并重点分析CD133-2+CD19-细胞群的相关信号通路分子。 结果： 1、流式细胞术结果显示：CD133-1、CD133-2在B-ALL中的表达水平明显高于正常对照骨髓中的表达水平，差异具有显著统计学意义（P 0.01）；在B-ALL中，CD133-2的阳性表达率和表达水平均较CD133-1高，差异具有统计学意义（P＜0.05）；儿童B-ALL中CD133-2的表达与患儿发病时的性别、年龄、初诊白细胞数、危险等级、融合基因、细胞遗传学改变及完全缓解率等临床预后指标均无相关性。 2、体外悬浮培养结果显示：CD133-2+CD19-细胞群在培养中呈倍数增长趋势，在第6周时扩增了（117.9±72.51）倍（有10倍到226倍的扩增），，而其他三组细胞未出现明显的增殖，差异具有显著统计学意义（P 0.01）。一例初诊时E2A/PBX1融合基因阳性的患儿，其分选后的细胞亚群经悬浮培养4周后，RT-PCR检测到E2A/PBX1基因阳性仍存在于CD133-2+CD19-细胞群。 3、体外半固体集落培养结果显示：CD133-2+CD19-细胞群在培养后第7天时混合集落（细胞数≥40）增长到（55±5.57）个，培养到第14天时达到（215±18.68）个；CD133-2+CD19+细胞在培养第7天时混合集落为（11±2.65）个，之后未再增多。而其他两组细胞培养2周均未出现集落。各群细胞差异具有明显的统计学意义（P＜0.01）。 4、实时定量PCR检测结果显示： CD133-2+CD19-细胞群为实验组与CD133-2+CD19+、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-三组对照组细胞相比，基因表达差异主要分布于Wnt、TGFβ、FGF、Hedgehog（Hh）及Notch信号通路，主要涉及TGF-β、Wnt和FGF信号通路中的BMPR1B、SMAD6、SMAD9、RGMA、TCF7L2、FZD8及FGFR2等分子。 结论： 1、儿童B-ALL中CD133-2异常高表达，它与患儿初诊时的性别、年龄、初诊白细胞数、危险等级、融合基因、细胞遗传学改变及完全缓解率等临床预后指标均无相关性。 2、儿童B-ALL中CD133-2+CD19-细胞群体外培养显示，其具有长期增殖和多向分化能力，具备LSC生物学特性，可能是儿童B-ALL的LSC表型标志。 3、儿童B-ALL的CD133-2+CD19-细胞群的调控可能与Wnt、TGFβ、FGF、Hedgehog（Hh）及Notch信号通路的异常密切相关，主要涉及TGF-β、Wnt和FGF信号通路中的BMPR1B、SMAD6、SMAD9、RGMA、TCF7L2、FZD8及FGFR2等分子。
【关键词】：CD133-2 儿童B系急性淋巴细胞白血病 预后 白血病干细胞 信号通路
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R733.71
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 目录7-8
• 序言8-10
• 第一部分 CD133-2 在儿童 B 系急性淋巴细胞性白血病的表达及其生物学特性10-31
• 一、材料和方法10-18
• 二、结果18-25
• 三、讨论25-28
• 四、结论28
• 参考文献28-31
• 第二部分 儿童 B 系急性淋巴细胞性白血病 CD133-2+白血病细胞的信号通路初步研究31-46
• 一、材料和方法31-35
• 二、结果35-39
• 三、讨论39-43
• 四、结论43
• 参考文献43-46
• 全文结论46-47
• 综述47-56
• 参考文献52-56
• 中英文对照缩略词表56-58
• 攻读学位期间公开发表的论文58-59
• 致谢59-60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 姚晨姣;范自力;;环氧化酶-2和血管内皮生长因子在急性白血病中的表达及意义[J];中国全科医学;2008年17期

2 唐文珏;刘壮;刘红艳;韦红英;雷永红;张鹏;;CD133在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及意义[J];山东医药;2011年01期

3 吕鸿雁;张金巧;王金铠;;急性髓性白血病VEGF、bFGF的表达及意义[J];山东医药;2011年01期

本文编号：530983