P47phox介导氧暴露后单个核细胞内活性氧簇产生的机制

发布时间：2017-07-14 03:20

  本文关键词：P47phox介导氧暴露后单个核细胞内活性氧簇产生的机制

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【摘要】：目的:观察32周以下早产儿不同浓度氧暴露后,外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMCs)内p47phox与活性氧簇产生的变化;以及运用NADPH氧化酶抑制剂二苯基碘(DPI)和夹竹桃麻素(apocynin)联合高浓度氧处理PBMCs后,p47phox与活性氧簇水平的改变,来探讨NADPH氧化酶亚单位p47phox调节PBMCs内活性氧簇升高的机制,为临床中减轻早产儿氧化应激损伤寻找新的靶点。方法:实验分两部分进行。第一,以临床中32周以下早产儿为对象,将其中入院时诊断为新生儿呼吸窘迫综合征(Neonatal respiratory distress syndrom,NRDS)且需要吸氧的患儿作为氧暴露组,根据吸氧浓度不同分为三组:FiO230%为低浓度吸氧组、FiO2在(30-40)%为中浓度吸氧组、FiO240%为高浓度吸氧组,每组患儿各10例,其中男18例,女12例。胎龄(28-32)周,体重(1350±138)g,组间患儿胎龄、出生体重无显著性差异。同期选择10例32周以下暂未吸氧的早产儿作为空气组,其中男5例,女5例。胎龄(30-32)周,体重(1347±116)g。氧暴露组与空气组间患儿胎龄、出生体重无显著性差异,具有可比性。该实验通过四川医科大学附属医院伦理委员会的批准,所有患儿进行实验前均征得家属同意并签署知情同意书。空气组及氧暴露组患儿不同浓度氧疗48小时后,均经桡动脉采血3ml。分离取得PBMCs及血清标本用于检测。实验第二部分,出生后即入我科的32周以下早产儿,尚未吸氧前,征得家属同意并签署知情同意书后经桡动脉采血2 ml,经Ficoll密度梯度离心法,分离纯化PBMCs,以PBMCs为对象,将其分为以下四组:常规培养组,置于37℃、50ml/l的co2培养箱中培养48h;高氧处理组,按3l/min通入950ml/l的o2与50ml/l的co2混合气体,10min后,立即用封口胶密封培养瓶,置于培养箱中培养48h;高氧联合dpi处理组与高氧联合夹竹桃麻素(apocynin)处理组根据文献报道和预实验结果,分别选择5μmol/l、100μmol/l处理细胞后再按上述方法建立高氧损伤模型并培养48h;高氧及相应处理组培养48h后,均用cys-1数字式测氧仪检测培养瓶中o2的浓度,将低于900ml/lo2的标本弃去。离心采集pbmcs和培养液作为标本。将两部分实验中所获得的标本,均采用mitosoxred标记结合激光共聚焦显微镜检测pbmcs内ros的生成量、硫代巴比妥酸比色法检测血清/培养液中丙二醛含量、免疫荧光检测p47phox在细胞内的定位及移位率、westernblot检测p47phox的蛋白表达量。结果:第一,临床样本中,随着早产儿吸氧浓度的升高,pbmcs内活性氧与血清丙二醛明显升高,p47phox由包质向包膜移位的细胞数增多,p47phox的移位率明显增加,p47phox的蛋白表达量也随之增加(p均0.05);第二,培养pbmcs各组中,pbmcs经高氧及相应药物处理48h后,与高氧处理组相比,其余三组活性氧和丙二醛明显减少,p47phox移位率与表达量也显著降低(p均0.05);与常规培养组相比,高氧联合dpi处理组及高氧联合apocynin处理组中ros、丙二醛、p47phox移位率与表达量并无显著差异(p均0.05)。结论:早产儿和pbmcs经氧暴露后,p47phox可增加向胞膜移位,上调其表达量,这与ros和丙二醛增加是一致的。而对pbmcs运用nadph氧化酶抑制剂dpi和apocynin处理后,p47phox移位率、表达量出现减少,此时,ros和丙二醛也相应减少。这提示p47phox可增加向胞膜移位,上调其表达量来调节PBMCs内活性氧簇的升高,而DPI和apocynin能通过降低p47phox移位与表达来减少高氧诱导的PBMCs内活性氧簇的产生。
【关键词】：早产儿 外周血单个核细胞 高氧暴露 p47phox 二苯基碘 夹竹桃麻素
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R722.6
【目录】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-14
• 材料与方法14-27
• 结果27-31
• 附图31-35
• 讨论35-42
• 结论42-43
• 参考文献43-50
• 英文缩写及中英文对照50-51
• 致谢51-52
• P47phox 介导活性氧产生与疾病的关系 综述52-64
• 参考文献60-64
• 攻读硕士学位期间发表和撰写的论文64-65

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 金鹰,唐玫,李国明;实用淋巴细胞培养技术[J];激光生物学报;2000年01期

2 卢美燕;董文斌;;氧化应激在高体积分数氧肺损伤中的作用[J];实用儿科临床杂志;2012年22期

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本文编号：539479