微小RNA在脓毒症患儿外周血的表达的初步研究

发布时间：2017-07-14 04:07

  本文关键词：微小RNA在脓毒症患儿外周血的表达的初步研究

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【摘要】：背景：脓毒症是指由感染导致的全身性炎症反应综合征（SIRS），病情往往进展迅速，且患病人数逐年增加。如果不能采取有效措施控制早期持续的SIRS，尤其在儿童脓毒症患者，可发展为脓毒性休克、多器官功能障碍综合征（MODS），已成为儿科重症监护病房（PICU）危重患儿主要死亡原因，同时增加了患儿家庭的经济负担。尽管目前脓毒症的诊断和治疗取得了很大进展，但在过去的几年里致死率仍然较高。所以对脓毒症的早期诊断和治疗显得尤为重要。但是脓毒症早期的临床表现和非感染因素引起SIRS非常相似，很难鉴别。传统的反应感染的指标如体温、白细胞计数、红细胞沉降率等的敏感性和特异性均难以满足临床需要。C反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）等指标也不能有效的把由非感染因素引起的SIRS与脓毒症及其严重程度鉴别开，有必要找到一种理想的脓毒症生物标志物进行早期诊断、判断预后，并能够区分感染以及非感染引起的SIRS。 微小RNA（miRNA）是一类小的非编码RNA，广泛参与调控细胞的生长、发育、分化及凋亡等各个环节，并与生理状态的改变以及疾病的发生、发展密切相关。既往研究表明，不同疾病人群的血清、血浆或者组织中miRNA表达不同，近年来已经相继在许多疾病（如肿瘤、急性心肌梗死、类风湿性关节炎、糖尿病、肾病、炎症性肠病、药物性肝损伤等）都证实了血清或血浆中的某种miRNA水平可以作为疾病的生物学标志物。miRNA作为转录后调节基因，与脓毒症相关信号途径和免疫功能调控相关。本研究就是观察在小儿脓毒症的外周血中和炎症有关的miRNA的表达水平。 目的：建立从血浆和外周血CD14+单核细胞（MC）中提取循环miRNA的方法。比较在小儿脓毒症、其它非感染因素引起的SIRS、健康儿童三组人群中表达差异的循环miRNA水平。比较小儿脓毒症表达差异的循环miRNA与其它炎性指标TNF-α、IL-10水平的相关性。寻找敏感性和特异性较CRP、PCT更好的早期诊断小儿脓毒症的生物学标志物。 方法：选取2012年8月~2013年03月在重庆医科大学附属深圳市儿童医院PICU住院的35例脓毒症患儿，男23例，女12例，平均年龄1.82±1.17岁。根据患儿病情严重程度分为一般脓毒症（19例）和严重脓毒症（16例）。选取同期住院的15例外科手术后患儿作为SIRS组及15例来医院体检的同龄健康儿童作为对照组。选择与炎症反应密切相关的6个miRNA （miR-21、miR-125b、miR-132、miR-146a、miR-155、miR-223）为目的miRNA，利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术，，检测并比较其在小儿脓毒症患者、非感染SIRS病人和健康对照人群血浆和外周血CD14+MC中的表达水平。利用流式CBA技术检测血浆中TNF-α和IL-10的水平。使用ROC曲线下面积（AUC）比较差异表达的miRNA与临床广泛开展的实验室指标CRP、PCT的灵敏度和特异度。 结果：各组年龄、性别比较差异无统计学意义（P0.05）。本研究成功从外周血标本的血浆及CD14+MC中提取出miRNA。相对于SIRS组和对照组，脓毒症患儿血浆中miR146a、miR-223及外周血CD14+MC中miR-146a的表达上调，外周血CD14+MC中miR-223表达下调，差异均有统计学意义（P0.05）。SIRS组血浆TNF-α水平较对照组升高；一般脓毒症组患儿血浆中TNF-α水平较严重脓毒症患儿升高。脓毒症组血浆IL-10、IL-10/TNF-α水平较SIRS组和健康对照组均升高。IL-10、IL-10/TNF-α与CD14+MC中miR-223水平呈负相关；与血浆和CD14+MC中miR-146a水平呈正相关。CD14+MC中miR-223、血浆中miR-146a的AUC（0.750和0.813）均大于CRP（0.555）和PCT（0.683）。前者的灵敏度为62.86%，特异度为80%；后者的灵敏度为51.43%，特异度为100%。 结论：利用qRT-PCR方法能够成功提取检测外周血血浆和CD14+MC中的miRNA。相对于SIRS及健康儿童，脓毒症患儿血浆和CD14+MC中miR-146a、miR-223差异表达，有可能作为小儿脓毒症早期诊断的分子标志物。
【关键词】：脓毒症 外周血 儿童 微小RNA
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R720.597
【目录】：

• 符号说明5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-16
• 第一部分 微小 RNA 在脓毒症患儿血浆和 CD14+单核细胞中的表达16-30
• 第一章 微小 RNA 在脓毒症患儿血浆中的表达16-24
• 1 材料和方法16-21
• 2 结果21-23
• 3 小结23-24
• 第二章 微小 RNA 在脓毒症患儿外周血 CD14+单核细胞中的表达24-30
• 1 材料和方法24-26
• 2 结果26-28
• 3 小结28-30
• 第二部分 TNF-α和 IL-10 在脓毒症患儿血浆中的表达水平30-35
• 1 材料和方法30-32
• 2 结果32-34
• 3 小结34-35
• 讨论35-39
• 全文小结39-40
• 参考文献40-42
• 文献综述42-52
• 参考文献49-52
• 致谢52-53
• 攻读硕士学位期间发表论文和参加科研情况53-54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 杨燕文;王莹;李璧如;赵醴;钱娟;任宏;;儿童严重脓毒症死亡危险因素分析[J];临床儿科杂志;2009年01期

2 刘娟;钱素云;;小儿脓毒症和严重脓毒症发病情况单中心调查[J];临床儿科杂志;2010年01期

本文编号：539574