HCMV宫内感染新生小鼠肺损害TLR2表达

发布时间：2017-07-17 10:29

  本文关键词：HCMV宫内感染新生小鼠肺损害TLR2表达

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【摘要】：目的:建立HCMV宫内感染新生小鼠肺损害模型,观察TLR2表达及My D88、IL-8以及IFN-β水平变化,探讨HCMV宫内感染致新生小鼠肺损害与TLR2信号通路的关系。方法:1.动物模型的构建与评估:随机选取8-10周龄清洁级(SPF)BALB/c小鼠,随机分为A、B和C三组(雌雄比均为2:1)。A组小鼠予腹腔注射HCMV AD169株悬液0.5ml(5.0log TCID50)一次,B组腹腔注射一次未接种病毒的HELF细胞悬液0.5ml,C组不予任何注射。注射7天后分别对三组小鼠进行血清HCMVIgM检测(ELISA法)。在A组HCMV-IgM阳性小鼠中随机选择54只(雌:雄=2:1),在B、C组HCMV-IgM阴性小鼠中各随机选择15只(雌:雄=2:1),分别配对饲养并自然分娩获得仔鼠。观察三组雌性小鼠受孕时间、新生小鼠死胎率,一半新生小鼠于生后第一天(生后24小时内,P1)低温麻醉,取肺组织和血液。半侧肺组织用于HCMV-IgM(金标免疫法)及病理学检测(HE染色),另外半侧肺组织-80℃冻存。ELISA法检测血清HCMVIgM。统计仔鼠宫内感染率及肺损害发生率。2.TLR2表达与相关分子关系:以上述三组冻存肺组织为研究对象。血清和肺组织中HCMV IgM均阳性的A组小鼠所产的新生小鼠肺组织,根据病理结果分为A1组(有肺损害)和A2组(无肺损害),随机选择血清HCMV-IgM与肺组织HCMV-IgM检测结果为阴性且病理学证实无肺损害的B组及C组备用的新生小鼠肺组织标本为B1(空白对照)和C1组(正常对照)。A、B、C三组各一半新生小鼠于生后第7天(P2)按第1天的方法处理及分组。分别检测各组(第1天、第7天)新生小鼠肺组织TLR2m RNA表达(RT-q PCR)及My D88、IL-8、IFN-β水平(ELISA)。结果:1.注射7天后A组小鼠血清HCMVIgM检测阳性率(85%)明显高于B组(7.6%)及C组(0%),差异有统计学意义(P0.05)。配对饲养后三组雌小鼠受孕时间(天)分别为(8.7±1.5、6.5±1.1、6.4±0.8),平均每次产新生鼠数(只)分别为(6.5±1.3、8.0±1.2、7.7±1.1),新生小鼠血清HCMV-IgM阳性率(%)分别为(53.3、4.2、3.1),新生小鼠肺组织HCMV-IgM阳性率(%)分别为(27.7、0、0),差异均有统计学意义(P0.05)。A组新生小鼠肺组织匀浆HCMV-IgM阳性的肺组织病理切片可见明显的炎性病理改变,余两组新生小鼠肺组织切片均未见病理改变。2.A1组、A2组、B1组和C1组P1肺组织TLR2-m RNA的?Ct值分别为9.8±1.2、12.0±2.2、12.7±1.6、12.7±2.3,差异有统计学意义(P0.05),P2的?Ct值差异无意义(P0.05)。第1天A1组My D88、IL-8、IFN-β水平分别为5.8±0.9 ng/ml、39.8±2.8pg/ml、20.3±1.8ng/L,明显高于其他三组,差异有统计学意义(P0.05)。A1组My D88、IL-8水平P2较P1下降,差异有统计学意义(P0.05)。A2组My D88、IL-8、IFN-β的水平与B1、C1组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:通过腹腔注射接种HCMVAD169毒株能成功感染小鼠,并造成胎鼠HCMV宫内感染,部分新生小鼠出现肺部炎症反应,显示HCMV宫内感染致肺损害小鼠模型构建成功。HCMV宫内感染致新生小鼠肺损害可能与肺组织TLR2高表达有关。高表达TLR2主要通过My D88依赖途径诱导炎症因子释放的机制参与肺损害的发生。
【关键词】：巨细胞病毒 TLR2 宫内感染 新生小鼠 肺损害
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R722.1
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-9
• 摘要9-11
• ABSTRACT11-14
• 前言14-18
• 第一部分 人巨细胞病毒宫内感染新生小鼠肺损害动物模型的构建18-32
• 材料与方法18-25
• 1.材料和试剂18-19
• 1.1 主要试剂18
• 1.2 主要实验仪器18-19
• 1.3 实验动物19
• 1.4 病毒株和细胞株19
• 2.方法19-25
• 2.1 病毒培养方法19-21
• 2.2 实验动物处理与分组21
• 2.3 新生小鼠肺组织病理切片制备及染色21-23
• 2.4 ELISA操作步骤23
• 2.5 统计学方法23
• 2.6 技术路线图23-25
• 结果25-28
• 讨论28-31
• 结论31-32
• 第二部分 新生小鼠TLR2表达对相关分子的影响32-46
• 材料与方法32-38
• 1.材料32-33
• 1.1 研究对象32
• 1.2 主要试剂及相关实验仪器32-33
• 1.3 引物设计33
• 2 方法33-38
• 2.1 肺组织TLR2-m RNA的Real-time Quantitative PCR检测33-36
• 2.2 相关分子（IL-8、IFN-β、My D88）检测36-37
• 2.3 统计方法37-38
• 结果38-42
• 讨论42-46
• 结论46
• 全文总结及展望46-47
• 参考文献47-53
• 综述 炎症与新生儿肺部疾病53-74
• 参考文献61-74
• 作者简介及读研期间主要科研成果74-75
• 致谢75

【参考文献】

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本文编号：553175