腺病毒介导的IL-10及IGF-1基因联合干预对NOD鼠T1DM发病早期胰岛β细胞的保护作用

发布时间：2017-07-20 18:23

  本文关键词：腺病毒介导的IL-10及IGF-1基因联合干预对NOD鼠T1DM发病早期胰岛β细胞的保护作用

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【摘要】：目的观察腺病毒介导的鼠白细胞介素10(Ad-mlL-10)及胰岛素样生长因子1(Ad-mIGF-1)基因联合干预对NOD小鼠1型糖尿病发病早期胰岛β细胞的保护作用,为临床早期干预提供动物实验基础。 方法17-20周龄近期发病的雌性NOD小鼠24只,随机分为①Ad-mIGF-1组、②Ad-mIL-10组、③Ad-mIL-10+Ad-mIGF-1组、④糖尿病对照组,另选取相同周龄、至实验末仍未发病的小鼠为⑤空白对照组。发病后立即干预,分别给予①、②、③组腹腔注射Ad-mIGF-1、Ad-mIL-10、Ad-mIL-10+Ad-mIGF-1,各0.1ml,④、⑤组未予任何干预。定期监测小鼠体质量、尿糖及血糖,行胰腺病理切片HE染色及免疫组化观察胰岛炎症浸润程度和IL-10、IGF-1基因胰腺表达情况,测定血清IL-10、IGF-1、IFN-γ、IL-4和C肽水平。 结果1.IL-10、IGF-1基因在胰腺局部表达增强,血清中水平也相应升高； 2.基因干预后小鼠血清IFN-γ水平降低,IL-4、IL-10水平升高,联合基因干预组效果更显著(p0.01)；IL-10单基因干预组较IGF-1单基因干预组IFN-γ水平降低,IFN-γ/IL-4降低(p0.01)； 3.IL-10单基因及联合基因干预后C肽水平升高,联合基因干预组升高更明显(p0.01),但IGF-1单基因干预组C肽水平未升高(p0.05)； 4.与糖尿病对照组小鼠比较,基因干预组小鼠胰岛炎程度及血糖水平差异无统计学意义(p0.05),在基因干预后3周时IL-10单基因及联合基因干预组小鼠体质量降低(p0.05)。 结论1.腹腔注射Ad-mIL-10、Ad-mIGF-1后,IL-10、IGF-1分别在胰腺高表达,血清中水平也相应升高； 2.IL-10和/IGF-1基因干预,可发挥一定地免疫调节作用,其中IL-10基因干预较IGF-1基因干预效果好,联合基因干预较单基因干预效果更显著； 3.IL-10单基因及联合基因干预,可发挥一定地胰岛β细胞功能保护作用,其中联合基因干预效果更明显,但IGF-1单基因干预组未发现此作用； 4.IL-10和/IGF-1基因干预,无减轻胰岛炎作用,在控制血糖水平及增加体质量方面无改善作用。
【关键词】：白细胞介素10 胰岛素样生长因子1 胰岛B细胞 NOD小鼠 1型糖尿病
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R725.8
【目录】：

• 摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-10
• 第一章 材料和方法10-18
• 1.1 主要仪器、试剂及耗材10-12
• 1.1.1 主要仪器10
• 1.1.2 主要试剂及耗材10
• 1.1.3 常用试剂配制10-11
• 1.1.4 实验动物11
• 1.1.5 病理、免疫组化分析试剂及设备11
• 1.1.6 酶联免疫吸附法(ELISA)实验设备11-12
• 1.1.7 重组腺病毒载体12
• 1.2 细胞培养、重组腺病毒的扩增及滴度测定12-13
• 1.2.1 细胞培养12
• 1.2.2 重组腺病毒扩增12
• 1.2.3 重组腺病毒滴度测定12-13
• 1.3 实验动物分组、处理及标本采集13
• 1.3.1 动物分组13
• 1.3.2 动物处理及标本采集13
• 1.4 血清IL-10、IGF-1、IL-4、IFN-γ、C肽的测定13-14
• 1.4.1 血清IL-10测定13-14
• 1.4.2 血清IGF-1测定14
• 1.4.3 血清IL-4测定14
• 1.4.4 血清IFN-γ测定14
• 1.4.5 血清C肽测定14
• 1.5 胰腺病理形态学观察14-15
• 1.5.1 胰腺标本固定与石蜡包埋14
• 1.5.2 切片、展片与粘片14-15
• 1.5.3 切片行HE染色15
• 1.5.4 胰岛炎性浸润程度15
• 1.6 免疫组化15-16
• 1.6.1 操作步骤15-16
• 1.6.2 IL-10在胰腺的局部表达情况16
• 1.6.3 IGF-1在胰腺的局部表达情况16
• 1.7 统计学方法分析16-18
• 第二章 结果18-28
• 2.1 腺病毒的扩增及其滴度测定18
• 2.2 小鼠尿糖、血糖、体质量监测18-20
• 2.3 小鼠血清细胞因子测定20-22
• 2.4 小鼠血清C肽测定22-23
• 2.5 小鼠胰腺炎症浸润程度23-24
• 2.6 小鼠胰腺免疫组化24-28
• 第三章 讨论28-31
• 结论31-32
• 参考文献32-34
• 综述34-50
• 参考文献43-50
• 攻读学位期间的研究成果50-51
• 致谢51-52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 陈志红;李堂;胡素娟;王桂琴;;鼠胰岛素样生长因子-1重组腺病毒的构建及其在胰岛β细胞的表达[J];生物医学工程学杂志;2009年05期

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5 宋青;乔凌燕;田飞;陈志红;李堂;;腺病毒介导鼠胰岛素样生长因子1基因对胰岛β细胞的保护作用[J];中国组织工程研究;2012年18期

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本文编号：569417