CITED2基因突变及甲基化与先天性心脏病关系的研究

发布时间：2017-07-30 18:03

  本文关键词：CITED2基因突变及甲基化与先天性心脏病关系的研究

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【摘要】：目的：探讨先天性心脏病中CITED2基因突变的致病机制即对转录因子HIF-1α的表达的影响，，同时检测先天性心脏病患儿CITED2基因启动子区CpG岛的甲基化情况,并进一步研究CITED2基因的转录水平的改变，探讨其与先天性心脏病的发生的相关性。 方法：将成功构建的CITED2（c.573-578del6）突变重组质粒及CITED2野生型质粒分别转染到HepG2及H9C2细胞中，置于低氧培养条件下培养24小时，分别提取RNA，检测HIF-1α的mRNA的表达差异。同时48小时后提取蛋白，检测HIF-1α蛋白的表达差异。收集31例先天性心脏病患儿及2例意外死亡儿童的右心耳组织，分别提取组织基因组DNA，采用亚硫酸氢盐修饰试剂盒对基因组DNA进行亚硫酸氢盐的修饰后并保存。利用生物信息学软件分析筛选其中两段，分别采用亚硫酸氢盐修饰结合测序法（BSP法）及甲基化特异性PCR法（MSP法）进行甲基化的检测。提取甲基化组及未甲基化组RNA，并逆转录为cDNA，运用实时荧光定量PCR法检测两组CITED2基因mRNA水平的表达差异。 结果： 1.HepG2及H9C2细胞中均存在，HIF-1α的mRNA的表达：野生组与空载体组相比，表达量明显降低（P0.05）；突变组表达量高于野生组(P0.05)；而空载体组与未转染组相比，未见明显差异。 2.HepG2及H9C2细胞中均存在，HIF-1α蛋白的表达：野生组与空载体组相比，表达量明显降低(P0.05)；突变组均高于野生组，差异具有统计学意义(P0.05)；空载体组与未转染组相比，未见明显差异。 3.采用BSP法检测结果发现：在克隆测序成功的12例先天性心脏病心肌组织中，有10例发现存在甲基化,甲基化阳性率为83%（10/12）。 4.采用MSP法检测结果发现：在19例先天性心脏病心肌组织中发现16例存在甲基化，甲基化阳性率为84%（16/19）。 5.对照组甲基化检测阳性率均为0%。 6.实时荧光定量PCR检测结果显示甲基化组与对照组相比 CITED2基因mRNA表达水平明显降低，差异具有统计学意义。 结论： 1.CITED2能反馈的抑制HIF-1α的表达。 2.CITED2突变后使得CITED2对HIF-1α的负反馈抑制作用减弱。 3. CITED2基因突变引起的HIF-1α的过表达可能是促进先天性心脏病的发生的因素之一。 4.先天性心脏病中存在CITED2基因启动子区CpG岛的异常甲基化的改变,且CITED2基因的异常甲基化下调了其mRNA的表达水平。 5.CITED2基因异常甲基化的改变可能是促进人类先天性心脏病发生的又一因素。
【关键词】：CITED2 先天性心脏病 基因突变 甲基化
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R725.4
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 第一部分 CITED2 基因突变对转录因子 HIF-1α表达的影响13-22
• 1 材料与方法13-18
• 2 结果18-19
• 3 讨论19-21
• 4 小结21-22
• 第二部分 CITED2 基因 CpG 岛甲基化与先天性心脏病的关系22-28
• 1 材料与方法22-25
• 2 结果25-26
• 3 讨论26-27
• 4 小结27-28
• 全文图片28-35
• 全文总结35-36
• 参考文献36-39
• 文献综述39-45
• 参考文献43-45
• 致谢45-46
• 攻读学位期间发表的学术论文目录46-47

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本文编号：595453