rhEPO对新型BPD模型肺发育及肺Bcl-2、Caspase-9表达的影响及意义

发布时间：2017-08-01 15:02

  本文关键词：rhEPO对新型BPD模型肺发育及肺Bcl-2、Caspase-9表达的影响及意义

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【摘要】：目的:(1)探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)对新型支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)模型新生大鼠肺组织病理改变及肺Bcl-2、Caspase-9蛋白和mRNA表达的影响。(2)探讨磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路在重组人促红细胞生成素保护新型BPD中的作用。方法:定期受孕SD大鼠分别于孕第15天孕囊内注射脂多糖(LPS)或生理盐水(NS);予NS者新生鼠分为A、B、C组,分别予空气(氧浓度21%)、高氧、高氧+rh EPO处理,空气处理组为对照组;予LPS者新生鼠分为D、E、F组,分别予高氧、高氧+rhEPO及高氧+rhEPO+LY294002处理。高氧即给予60%高氧暴露;C、E、F组分别于高氧暴露第1天起,隔天背部皮下注射rhEPO(1 200 IU/kg),F组于注射rhEPO前30min背部皮下注射LY294002(0.3 mg/kg),共7次。于实验第1、7、14天每组随机选取8只处死。采用HE染色观察肺组织病理改变,RT-PCR和Western blot法检测肺组织中BCL-2、Caspase-9 mRNA和蛋白的表达。结果:B、D组新生大鼠肺组织发生明显病理改变,Caspase-9蛋白及mRNA表达增加,同时BCL-2蛋白及mRNA表达减少;C、E组肺组织病理变化明显改善,Caspase-9蛋白及mRNA表达减少,同时BCL-2蛋白及mRNA表达增加;F组与E组比较,前者病理改变要差,Caspase-9蛋白及m RNA表达明显增加,而BCL-2蛋白及mRNA表达明显减少。肺组织BCL-2、Caspase-9蛋白和mRNA的表达于实验第1、7、14天末各组间的差异均有统计学意义(P均0.05)。结论:宫内炎性暴露和生后高氧干预均可引起支气管肺发育不良,同时可导致肺组织BCL-2、Caspase-9 mRNA和蛋白表达发生明显改变;rhEPO可明显减轻肺组织病理改变,增加BCL-2表达,同时减少Caspase-9表达,LY294002抑制PI3K活性后可明显降低rhEPO对新型BPD的保护作用,提示rhEPO可能通过减少肺细胞凋亡,最终改善肺发育,从而对新型BPD起一定的保护作用,其机制可能与PI3K/AKT信号转导通路有关。
【关键词】：支气管肺发育不良 脂多糖 高氧 重组人促红细胞生成素 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R722.1
【目录】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英汉缩略词对照表10-11
• 前言11-13
• 1 材料与方法13-33
• 1.1 实验材料与仪器13
• 1.1.1 实验动物13
• 1.2 主要实验试剂13-18
• 1.2.1 主要药品与试剂13-14
• 1.2.2 主要试剂的配制14-18
• 1.3 主要实验仪器18-19
• 1.4 实验方法19-33
• 1.4.1 动物模型的制备及标本收集19-21
• 1.4.1.1 雌雄大鼠合笼19
• 1.4.1.2 孕囊注射19-20
• 1.4.1.3 新型BPD动物模型的制备及分组20
• 1.4.1.4 高氧干预20-21
• 1.4.1.5 rhEPO干预和LY294002处理21
• 1.4.1.6 标本采集21
• 1.4.2 HE染色切片制作21-23
• 1.4.2.1 石蜡切片制作22
• 1.4.2.2HE染色22-23
• 1.4.3 RT-PCR法检测肺组织Bcl-2、Caspase-9 mRNA表达23-28
• 1.4.3.1 肺组织RNA提取过程23-24
• 1.4.3.2 RNA纯度、浓度及完整性测定24-25
• 1.4.3.3 逆转录25-26
• 1.4.3.4 PCR反应26-28
• 1.4.4 western blot法检测肺组织Bcl-2、Caspase-9 蛋白表达28-33
• 1.4.4.1 肺组织总蛋白的提取28
• 1.4.4.2 BCA法测定蛋白质浓度28-29
• 1.4.4.3 凝胶配置29-31
• 1.4.4.4 蛋白样品的处理及加样31
• 1.4.4.5 SDS-PAGE电泳31
• 1.4.4.6 半干法转膜31-32
• 1.4.4.7 免疫杂交32
• 1.4.4.8 蛋白质的检测32-33
• 1.5 统计学分析33
• 2 结果33-40
• 2.1 肺组织病理形态学改变33-35
• 2.2 肺组织BCL-2 和caspase-9 mRNA的表达情况35-38
• 2.3 肺组织Bcl-2、Caspase-9 蛋白的表达情况38-40
• 3 讨论40-46
• 4 结论46
• 参考文献46-52
• 综述52-62
• 参考文献58-62
• 攻读学位期间发表的学术论文目录62-63
• 致谢63-64

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本文编号：604794