TNF-α对哮喘小鼠肺泡灌洗液中LTD4、LTE4水平和肺组织中CysLTR1表达的影响

发布时间：2017-08-02 06:17

  本文关键词：TNF-α对哮喘小鼠肺泡灌洗液中LTD4、LTE4水平和肺组织中CysLTR1表达的影响

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【摘要】：目的：以哮喘小鼠模型为研究对象，观察肿瘤坏死因子-α（Tumornecrosis factor-α, TNF-α）是否参与调控其肺泡灌洗液中LTD4、LTE4含量变化及肺组织中半胱氨酰白三烯受体1(Cysteinyl leukotriene receptor1,CysLTR1)表达情况。方法：将48只健康雌性Balb/c小鼠，随机分为六组：正常组（A组），哮喘模型组（B组），低剂量TNF-α腹腔注射给药哮喘组（C1组，0.1μg/kg），高剂量TNF-α腹腔注射给药哮喘组（C2组，0.4μg/kg，），低剂量TNF-α雾化吸入给药哮喘组（D1组，0.1μg/kg），高剂量TNF-α雾化吸入给药哮喘组（D2组，0.4μg/kg），每组分别为8只。建立哮喘动物模型，在末次激发后处死小鼠，取其肺泡灌洗液和肺组织，酶联免疫吸附剂测定（ELISA）检测肺泡灌洗液中LTD4和LTE4含量水平，，苏木精—伊红染色法（HE染色）、免疫组织化学法（IHC）、实时免疫荧光定量PCR（QPCR）和蛋白质免疫印迹法（Western Blot）检测肺组织中CysLTR1表达情况。结果：（1）肺组织HE染色病理切片显示哮喘组和TNF-α干预组有明显气道炎症改变；（2）BALF中各组LTD4含量分别为（19.28±2.34）μg/L、（24.45±3.17）μg/L、（25.93±6.63）μg/L、（31.63±4.18）μg/L、（26.04±5.98）μg/L、（31.06±5.77）μg/L,干预组均高于正常对照组和哮喘模型组（P0.05）,高低剂量组之间差异有统计学意义（P0.05）；各组LTE4含量分别为（40.00±2.71）ng/L、（46.90±3.91）ng/L、（52.16±2.73）ng/L、（53.41±5.01）ng/L、（50.41±4.70）ng/L、（52.26±4.70）ng/L。干预组均高于正常对照组和哮喘模型组（P0.05）,但不同剂量组之间差异不显著（P0.05）（3）BALF各组EOS计数情况为（0.01±0.00）×106/L、（1.76±0.80）×106/L、（2.80±0.27）×106/L、（3.47±0.60）×106/L、（2.68±0.47）×106/L、（3.58±0.54）×106/L。干预组EOS数目显著增加,但C1组和D1组之间、C2组和D2组之间差异不显著，无统计学意义（P0.05）（4）IHC法测定各组CysLTR1阳性细胞表达计数分别为：22.899±1.236、26.333±3.240、33.222±4.585、51.888±6.988、39.010±5.232、52.222±6.593。其中B组和C1组之间、C2组和D2组之间差异没有统计性，其余任意两组间差异均有统计学意义（P＜0.05）（5）免疫组织荧光PCR法检测各组的CysLTR1基因表达情况为0.688±0.206、1.648±0.534、3.822±1.585、5.888±0.988、4.010±1.232、6.136±1.287，其中C1组和D1组之间、C2组和D2组之间差异没有统计性，其余任意两组间差异均有统计学意义（P＜0.05）（6）Westernblot法检测各组的CysLTR1蛋白相对密度分别为0.797±0.081、1.422±0.17、1.784±0.210、2.448±0.096、2.023±0.058、2.933±0.034其中B组和C1组、C2组和D2组之间差异没有统计性，，其余任意两组间差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论：（1）TNF-α引起肺内炎性介质LTD4和LTE4产生增加，同时引起EOS和其它炎性细胞在气道和肺组织局部募集、浸润，维持和加重了哮喘病理改变，这可能是哮喘炎症状态持续存在的发生机制之一；(2）TNF-α对肺组织CysLTR1表达呈上调作用，在呼吸道病毒感染时，局部产生大量的TNF-α，这可能是病毒性呼吸道感染时诱发喘息发作的机理之一。
【关键词】：哮喘 TNF-α 白三烯 半胱氨酰白三烯受体1 调控
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R725.6
【目录】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英汉缩略词对照表10-11
• 前言11-14
• 1 材料与方法14-28
• 1.1 实验材料与仪器14-16
• 1.2 实验方法16-27
• 1.3 统计学分析27-28
• 2 结果28-36
• 2.1 哮喘发作症状28
• 2.2 肺泡灌洗液中 LTD4、LTE4 含量和嗜酸性粒细胞计数结果28-29
• 2.3 肺组织 HE 染色病理切片结果29-32
• 2.4 免疫组织化学法检测哮喘鼠肺组织 CysLTR1 结果32-33
• 2.5 实时免疫荧光定量 PCR 检测哮喘鼠肺组织 CysLTR1 基因表达结果…3133-34
• 2.6 蛋白质印迹法检测哮喘鼠肺组织 CysLTR1 蛋白结果34-36
• 3 讨论36-45
• 3.1 哮喘动物模型的建立36-38
• 3.2 CysLTs、CysLTR1 与支气管哮喘关系38-39
• 3.3 TNF-α与支气管哮喘关系39-43
• 3.4 TNF-α对哮喘小鼠肺泡灌洗液中 LTD4、LTE4 含量及肺组织中CysLTR1 表达影响及意义43-45
• 参考文献45-48
• 4 结论48-49
• 综述49-61
• 参考文献56-61
• 攻读学位期间发表的学术论文目录61-62
• 致谢62

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本文编号：607977